摘要：设计了12条能与血晶素相互作用形成dna酶的寡核苷酸链,并研究了它们催化4种不同底物[2,2-联氮基双(3-乙基苯并噻唑林-6-磺酸)二铵盐、2,7-二氯二氢荧光素二乙酯、酪胺、四甲基联苯胺]的催化活性及动力学过程。结果表明,G-四分体中碱基G形成的平面结构的层数、可以形成类发夹结构的互补dna短链、G-四分体侧环上碱基的个数以及类发夹结构连接臂上碱基的个数等因素均影响血晶素与dna的相互作用。除此之外,dna酶的催化活性不仅与血晶素和dna的结合常数有关,同时也受底物分子结构的影响。在所设计的12种dna酶中,2,2-联氮基双(3-乙基苯并噻唑林-6-磺酸)二铵盐是理想的比色测定底物,而酪胺是理想的荧光测定底物。

摘要：G-四链体-氯化血红素(hemin)dna酶是一种由特定的核酸G-四链体与hemin结合后形成的具有过氧化物酶活性的人工模拟酶。作为一类重要的dna酶,G-四链体-hemin dna酶近年来在分析化学领域受到了越来越多的关注。目前这类dna酶已被用在了多种传感器,包括金属离子传感器、适配体传感器、酶传感器、dna传感器及药物传感器的设计当中。本文对G-四链体-hemin dna酶在传感器设计中的应用进行了系统的介绍和评述,并对其未来的发展进行了初步的展望。

摘要：提出了一种可用于Hg2+快速检测的基于磁纳米颗粒与二段对称分裂式G-四分体dna酶的生物传感器.分别用紫外-可见光谱法,圆二色光谱法和荧光显微镜成像技术对实验设计的dna酶传感器进行了表征.传感器中磁纳米颗粒的应用不仅可以直接从水样中通过磁分离方法分离和富集被测物Hg2+,并且还能将游离的未与Hg2+结合的dna酶和hemin等除去,有效地提高检测灵敏度和降低背景信号;此外,二段对称分裂式G-四分体dna酶的运用还可增强传感器的灵活性和选择性.传感器对Hg2+检测的线性范围为0.8~20 nmol/L,检出限为0.3 nmol/L.当水体中的共存离子大量存在时,传感器对Hg2+的检测仍具有高度特异性.对实际水样的检测回收率在95.3%~104.4%之间.实验设计的dna酶传感器操作简便,费用低廉,具有良好的再生能力.可用于天然水体和饮用水样品中痕量Hg2+的检测.

摘要：以聚苯乙烯微球为载体,利用杂交链式反应,发展了一种基于T-Hg^(2+)-T特异性识别及串联分子间裂分G-四链体-血红素dna酶纳米线催化信号放大的Hg^(2+)"Turn on"型高灵敏生物传感器。当汞离子存在时,"T-Hg^(2+)-T"特殊结构的形成促使微球表面修饰的富T探针打开并捕获设计的发夹探针P1,由此引发与发夹探针P2之间的杂交链式反应。由于P1、P2的5'游离末端及3'游离末端都包含富G序列,通过杂交链式反应相互拉近并串联排列,在微球表面折叠形成包含串联分子间裂分G-四链体-血红素dna酶的自组装dna纳米线。在最优实验条件下,传感器对Hg^(2+)的线性检测范围为2 pmol/L～1 nmol/L,检出限为1.5 pmol/L;当试样中的共存离子大量存在时,传感器对Hg^(2+)仍然具有高的选择性。此方法检测Hg^(2+)具有良好的选择性、灵敏度及稳定性。

摘要：10-23dna酶是能主动切割mRNA的一类反义寡核苷酸.利用10-23dna酶的直接切割作用验证mRNA结构靶点的有效性.对筛选的绿色荧光蛋白(GFP)基因mRNA的4个靶点平行设计了4条反义寡核苷酸和4条10-23dna酶,对照组反义寡核苷酸将最佳靶点——靶点2的反义寡核苷酸突变2个碱基,对照组10-23dna酶将靶点2的10-23dna酶结合臂中央突变2个碱基.体外4条10-23dna酶切割mRNA的结果和相应的4条反义寡核苷酸依赖的RNaseH降解结果完全相似,细胞内4条10-23dna酶对绿色荧光蛋白的表达抑制作用与相应的4条反义寡核苷酸相似,表明10-23dna酶显示的最佳作用靶点同样是最佳作用效果的反义寡核苷酸结合靶.10-23dna酶可以作为评价mRNA结构靶点有效性的新工具.

摘要：以阿尔兹海默症相关的基因片段rs242557为研究对象,通过NUPACK软件预测Toehold(黏性末端)长度对链置换反应的影响,设计具有高特异性的双链核苷酸探针;富G的核苷酸序列首先被掩蔽在WatsonCrick双链结构中,当体系加入目标基因后,通过引发链置换反应解开该双链结构,形成的dna酶可催化氧化鲁米诺化学发光反应,最终采用微流控化学发光法实现单核苷酸多态性(SNP)分析.该方法不仅具有设计简单、免标记及检测通量高等优点,而且在仅消耗2μL试样的条件下实现了单碱基突变的rs242557目标基因的SNP分析(区分因子达56),正常目标基因的检出限为1.7 nmol/L.

摘要：自噬是真核细胞降解蛋白质的重要途径之一,在细胞的更新代谢中起重要作用.肿瘤细胞借助高水平的细胞自噬能够阻断细胞凋亡途径,降低化疗药物的抗肿瘤效果.本文通过设计编码有核酸适配体序列(Aptamer)和dna酶序列(dnazyme)的多功能dna纳米花,利用dna序列可负载化疗药物阿霉素(Dox)的特性,实现了对肿瘤细胞特异靶向的药物递送,并高效沉默肿瘤细胞的自噬相关基因ATG5,达到增敏抗肿瘤化疗的效果.通过RT-PCR实验验证合成的dna纳米花可以有效剪切肿瘤细胞中自噬相关基因ATG5的mRNA;并通过dna纳米花的细胞毒性和细胞凋亡实验研究了其对肿瘤细胞系MCF-7的靶向治疗作用,结果显示该多功能dna纳米花在增敏抗肿瘤化疗方面具有明显优势.

摘要：该文基于酶辅助靶标循环信号放大策略构建了用于黄曲霉毒素B1(AFB1)高灵敏检测的化学发光适体传感器。以G-四链体/氯化血红素dna酶为信号分子设计了免标记的适体探针H1-S1和发夹探针H2。适体探针结合目标AFB1,在核酸外切酶I辅助下,触发靶标循环反应产生发夹H1。发夹H1与H2杂交,释放出完整的G-四链体序列,并进一步与氯化血红素结合形成G-四链体/氯化血红素dna酶。dna酶通过催化氧化鲁米诺-H2O2化学发光体系产生化学发光信号,实现AFB1的放大检测。在最优实验条件下,化学发光强度与AFB1质量浓度的对数在0.001~100 ng/mL范围内呈良好的线性关系,相关系数(r2)为0.9955,检出限为0.93 pg/mL,回收率为93.7%~107%。该适体传感器操作简单、灵敏度高、特异性好,在黄曲霉毒素污染检测方面具有良好的应用前景。

摘要：目的　探讨尿道细胞外基质 (ECM )的制备方法。　方法　采用 4因素 3水平 ,9次实验的正交设计 [L9(34) ]。切取 37只兔的尿道 ,2 7条按正交设计随机分为 9组行尿道脱细胞处理 ,试验重复 3次。采用HE染色及计算机图像分析对尿道基质进行残余细胞成分计数 ,统计分析获得最佳方法 :0 .4 %胰蛋白酶、1%甲醛加 0 .2 %戊二醛、4 0U/mldna酶 (A3 B2 C3 方案 )。另 10条兔尿道制备成尿道ECM并用于同种异体尿道缺损修复实验 ;分别于修复术后 10d ,3、6及 2 4周取材观察缺损修复处组织再生情况。　结果　各组脱细胞后残余细胞成分量均不相同 ,第 7、9组未发现细胞残余成分 ;制备的尿道ECM经扫描电镜分析未发现细胞残片。缺损修复实验术后 10d ,基质中见单层上皮细胞 ,且有血管长入ECM中 ,但管径较小 ,基质和受体尿道连接处有炎性细胞浸润 ;3周时尿道ECM管腔已完全被上皮细胞覆盖 ;6周时可见平滑肌细胞再生 ,炎性细胞消失。 2 4周后基本结构近似正常。　结论　制备尿道细胞外基质中 3个关键条件的最佳水平为A3 B2 C3 ,即在尿道脱细胞处理过程中采用 0 .4 %胰蛋白酶、1%甲醛加 0 .2 %戊二醛、4 0U/mldna酶。