摘要：Cre是一种可以识别34个碱基对重组loxP位点的dna重组酶。我们开发了一种可以渗透细胞的Cre重组酶一TAT Cre，把它简单地加入细胞培养中就能够调剂敲除loxP位点的侧翼靶位。因此，TAT Cre可以有效地诱导dna重组，而不必利用Cre重组酶转基因或其它的遗传材料。这对于大量设计有loxP位点细胞的遗传调控将大有益处。

摘要：利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立tau-V337M突变的阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)小鼠模型。通过设计和体外合成单向导RNAs(single guide RNAs,sgRNA)及单链寡核苷酸(single-stranded oligonucleotides,ssODN),将sgRNA、Cas9蛋白、ssODN注射到小鼠受精卵内,利用dna切割和重组产生突变。为了提高重组效率,又在注射时添加Rad51蛋白。使用自然交配的雌鼠作为受体,将2细胞期的编辑胚胎进行单侧输卵管移植。研究发现通过添加Rad51蛋白可以获得较高的突变效率,在F0小鼠中获得了tau-V337M小鼠并进行扩繁,F0代tau-V337M小鼠可以将突变遗传给F1代。综上所述,本研究利用Cas9、ssODN和Rad51成功建立了首个tau-V337M基因位点突变的小鼠模型,为AD的研究和点突变模型制作提供了模型和方法基础。

摘要：植物表达载体是将目的基因转化宿主细胞的媒介,载体构建是通过遗传转化方法开展基因功能鉴定与应用等研究的重要环节。以构建玉米谷氨酰胺合成酶基因(GS1)表达载体pCUbi1390-Ubi-GS1-35S-EPSPS为例,研究简单、通用、高效的构建载体的方法。该方法目的片段和载体不需要酶切产生互补的黏性末端,只需通过在目的基因PCR上下游引物的5’端设计与线性载体两端有15个碱基的同源序列,根据序列的同源性,将目的基因插入载体中,通过PCR程序实现dna重组。结果表明,正确构建了设计的转化载体,该方法大大简化了载体构建的过程,也适用于任何一个基于单酶切位点把外源dna重组插入目标序列。

摘要：进入21世纪,一系列微生物学和分子生物学的进步允许用于新疫苗的抗原被明确地鉴定、设计、生产和投递,旨在优化诱导对明确的免疫原的保护性免疫应答。有关免疫系统正常工作和宿主-病原体相互作用的新认识促进了疫苗设计的合理性。疫苗的设计工具箱包括用全病原体、蛋白亚单位、多糖和病原体样颗粒来制备的疫苗,病毒/细菌载体的使用,加上以增强和扩展免疫应答的免疫佐剂和结合技术，诸如dna重组的这一类技术可以简化制造的复杂性，并可以促进大量抗原的一致性生产。

摘要：Antibody-based fusion proteins are the next generation of antibody therapies for cancer and other ***20 antigen,which is overexpressed on cell membranes in nearly 95% of cases of B-cell Non-Hodgkin's Lymphoma,is an attractive target for the therapy of B-lymphoid *** (LDM) is a potent enediyne-containing antitumor antibiotic that now has entered phase II clinical *** this study,we prepared an engineered fusion protein,scFv-LDP,consisting of an anti-CD20 scFv fragment and the apoprotein LDP of LDM using dna *** purification and refolding,scFv-LDP was found to bind specifically to CD20-positive lymphoma cells using ELISA and indirect immunofluorescent cytochemical staining *** energized fusion protein scFv-LDP-AE was obtained using molecular reconstitution of the active chromophore AE of LDM and *** assay revealed potent cytotoxicity of scFv-LDP-AE to CD20-positive Raji and Daudi cells,with IC 50 values of 1.21×10-11 and 6.24×10-11 mol L-1,*** in vivo subcutaneous xenograft model of CD20-positive B cell lymphoma in BALB/c (nu/nu) mice was also *** were given intravenously on day 14 and 21 after tumor *** terms of maximal tolerated doses,scFv-LDP-AE at 0.3 mg kg-1 suppressed tumor growth by 79.3%,and LDM at 0.05 mg kg-1 by 68.6% (P<0.05).Results suggested scFv-LDP-AE could be a potential candidate for tumor-targeting therapy.

摘要：目的:利用同尾酶技术构建pET15b-PEP-1-CAT重组质粒,为制备PEP-1-CAT融合蛋白进而为防治心肌缺血再灌注损伤奠定基础。方法:设计并合成两端分别带SalⅠ和BglⅡ酶切位点的CAT引物,用PCR方法以pZeoSV2(+)-CAT质粒为模板,特异性扩增CAT全长cdna。将扩增的CAT cdna与dATP反应,利用Taq dna聚合酶具有的非模板依赖性末端转移酶活性在CAT cdna的3′末端加"A"并纯化,然后应用TA克隆策略将纯化后的CAT cdna插入至中间载体pGEM-T Easy Vector中,经PCR、限制性酶切分析鉴定重组子pGEM-T-CAT。人工合成编码PEP-1的双链寡核苷酸,两端分别引入NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点,将其插入pET15b中得到重组质粒pET15b-PEP-1,然后酶切鉴定。pGEM-T-CAT和pET15b-PEP-1分别经SalⅠ-BglⅡ和XhoⅠ-BamHⅠ双酶切,利用同尾酶(SalⅠ与XhoⅠ,BglⅡ与BamHⅠ)能酶切产生相同黏性末端的特性,将回收得到的CAT cdna片段与pET15b-PEP-1相连,构建出重组质粒pET15b-PEP-1-CAT,经PCR及酶切鉴定,并通过核苷酸序列测序证实。结果:获得pET15b-PEP-1-CAT重组子,经测序分析证实,克隆入pET15b的PEP-1序列与设计合成的PEP-1序列一致,CAT序列与GeneBank中登录号为“AY028632”的CAT cdna序列一致。结论:pET15b-PEP-1-CAT的成功构建为产生融合蛋白H is tag-PEP-1-CAT进而为防治心肌缺血再灌注损伤奠定了基础。

摘要：目的　以克隆小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛可变区首尾区域的双独立片段为例 ,探讨克隆入同一载体的基因数多于一个时可采取的构建策略。方法　在一个基因A正义引物与另一基因B负义引物的 5′端分别设计与克隆载体相匹配的酶切位点 ,在B基因正义引物与A基因负义引物的 5′端设计相同的酶切位点。分别进行PCR扩增 ,再通过引物的 5′端相同的酶切位点进行两PCR产物的酶切与连接 ,以连接产物为模板 ,应用A基因正义引物和B基因负义引物进行PCR扩增 ,将此次PCR产物经常规方法克隆入载体。

摘要：本实验报告了人成骨蛋白 - 1成熟肽基因在大肠杆菌中的克隆与高效表达。通过计算机软件分析 ,采用大肠杆菌偏爱密码子设计并分段合成了人成骨蛋白 - 1成熟肽编码基因片段。用 PCR技术扩增目的基因片段 ,先克隆到 p UC1 9载体上 ,测序正确后再将其克隆到 p BV2 2 0表达载体上 ,以DH5α为宿主菌 ,42℃ ,6 h诱导表达。经 SDS- PAGE鉴定分析 ,在约 1 6× 1 0 3处有一新的蛋白质条带 ,扫描分析表明 ,该条带占菌体总蛋白含量的 40 %左右。

摘要：描述一种应用PCR技术定向引入dna小片段和特异酶切位点的方法。为了获得m2/loxp66EGFPloxp71基因片段。根据EGFP基因序列,设计一对特异引物,上、下游引物分别引入m2/loxp66、loxp71序列和Xhol、Mlu1酶切位点。以pEGFPN1质粒为模板,采用PCR扩增以合成dna双链,插入到克隆载体pMD18T。对重组子测序结果表明,实现了dna小片段和酶切位点的定向引入。