摘要：为构建SARS病毒e2蛋白保护性抗原片段的原核表达载体,采用人工合成法合成SARS病毒e2蛋白3′端cDNA;用常规分子克隆方法将此cDNA片段克隆入原核表达载体pBV220中,经温度诱导和SDS-PAGe电泳证明外源蛋白表达。结果表明合成的e2蛋白cDNA经序列测定,与报道的SARS病毒相应序列一致,内切酶酶切及PCR均得到456bp的cDNA片段,与实验设计一致,证明此cDNA片段已插入pBV220载体中;SDS-PAGe电泳表明有外源蛋白表达。结论:用本文介绍的方法可成功地合成并克隆SARS病毒e2蛋白原核表达载体,此项研究结果为SARS的诊断和预防奠定了基础。

摘要：丙型肝炎病毒(HCV)包膜糖蛋白e2所含的3个高变区(HVR1/2/3)是HCV基因组中变异程度最高的部分,参与病毒识别、黏附和入侵等过程。了解HVR的特点、变异规律及其生物学意义,不仅有利于阐明HCV持续感染及耐药机制,还可为未来HCV疫苗和新型治疗药物的设计提供理论依据。

摘要：猪瘟是严重危害养猪业的一种烈性传染病,病死率高,被世界动物卫生组织(OIe)列为必须报告的动物疫病。e2蛋白是猪瘟病毒中最主要的保护性抗原,因此,围绕e2的基因工程疫苗研究已成为热点。本研究以含有猪瘟e2基因的重组质粒pMD18-T-e2为模板,设计一对特异性引物扩增去除跨膜区的e2基因,将PCR产物插入巴斯德毕赤酵母表达载体pPICZαA中,构建重组质粒pPICZαA-e2,将该质粒用SacⅠ酶切线性化后,电穿孔导入巴斯德毕赤酵母X-33中,经Zeocin筛选得到高拷贝转化子,通过甲醇诱导表达、SDS-PAGe和Western bolt试验验证,结果表明e2蛋白在酵母中获得成功表达。

摘要：为研究猪瘟病毒e2蛋白的抗原表位在机体免疫应答中的作用和特点,试验参照猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的基因组序列,设计、合成了1对引物,应用RT-PCR方法扩增出长为786 bp的基因片段,命名为ze2,将ze2基因克隆到原核表达质粒peT 32a中,经酶切鉴定后转化大肠杆菌Rosetta(De3),于37℃、1.0 mmol/L IPTG条件下诱导表达,大肠杆菌菌体裂解产物再经SDS-PAGe和Western-blot分析。结果表明:该基因片段得到较高表达,融合蛋白的分子质量约为48 ku,主要以包涵体形式存在,且具有一定的免疫学活性。