摘要：目的ＥＢ病毒ＢＨＲＦ１基因克隆，其表达产物抑制ＣＨＯ细胞凋亡功能的研究。方法以Ｂ９５－８细胞株ＥＢＶＤＮＡ为模板设计一对引物，采用ＰＣＲ技术扩增ＢＨＲＦ１基因，用目的基因内的两个单酶切点ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅠ进行酶切鉴定。用引物上所引入的两个酶切位点ＮｃｏⅠ、ＳｃｌⅠ酶切目的基因后定向连接到ｐＢＶ２２１载体上，转入宿主菌ＤＨ５α经质粒抽提，单、双酶切鉴定，从所获克隆中筛选重组质粒克隆。温控诱导目的基因表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及凝胶薄层扫描分析。采用缺血清培养方法建立ＣＨＯ细胞凋亡模型。结果所得扩增产物长５９２ｂｐ与预期大小一致；筛选出的９个重组质粒克隆经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和扫描表明重组蛋白表达量占菌体蛋白总量的２．５％。将含重组蛋白的菌体蛋白加入缺血清培养体系，通过与空白菌体蛋白对照表明，重组蛋白具有明显的抑制ＣＨＯ细胞凋亡的能力。结论ＢＨＲＦ１蛋白具有有效控制血清缺乏所诱导的ＣＨＯ细胞凋亡功能，这为ＢＨＲＦ１蛋白的广泛应用提供了依据。

摘要：目的 对eb病毒（ebV）潜伏膜蛋白2（LMP2）中富含T、B细胞多表位肽段基因进行原核表达,并分析该多表位蛋白的抗原特性.方法 利用计算机在线软件预测ebV LMP2蛋白的CTL表位、Th表位.选取富含CTL表位和Th表位的肽段,兼顾其上下游已预测的B细胞表位,组成含多个T、B细胞表位的ebV LMP2多表位,该多表位基因序列经原核密码子优化后全序列合成,并克隆入原核表达载体pET32a（＋）得到pET32a（＋）/ebV-LMP2多表位重组质粒,经IPTG诱导在*** BL21（DE3）表达并纯化,经SDS-PAGE和Western blot分析鉴定;采用ebV膜蛋白家兔免疫血清和鼻咽癌患者血清进行Western blot分析其抗原特性;并利用ebV-LMP2多表位蛋白免疫BALB/c小鼠,分别采用LDH和ELISA方法检测小鼠脾细胞特异性CTL杀伤效应及血清特异性抗体IgG水平,以分析该表位蛋白的免疫原性.结果 LMP2（aa195-232）和LMP2（aa419-436）肽段富含CTL、Th和B细胞表位,将其串联后作为ebV LMP2多表位,该多表位基因在大肠杆菌中获得了表达.表达产物的相对分子质量（Mr）约27×103,与预期Mr相符;经Western blot证实ebV-LMP2多表位具有抗原特异性,可被ebV膜蛋白家兔免疫血清和鼻咽癌患者血清特异性抗体识别;小鼠免疫结果显示ebVLMP2多表位可诱导机体产生特异性的CTL杀伤效应,随着效靶比（1：5,1：10,1：25）增加,CTL杀伤活性逐渐增强（12.52%±2.59%,21.80%±1.08%,23.68%±3.74%）,同时产生了特异性血清IgG抗体反应（A490=0.258±0.040）,与对照组比较差异均具有统计学意义（P＜0.05）.结论 本研究设计的ebV-LMP2多表位具有良好的抗原性和一定的免疫原性.

摘要：目的探讨eb病毒(ebV)感染的实验室诊断方法。方法设计针对ebV基因组的引物和荧光标记探针,利用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测70例外周血标本。其中17例是确诊ebV感染及传染性单核细胞增多症患儿,27例是临床高度怀疑ebV感染患儿,26例是临床非ebV感染的患儿,并与检测ebV抗体VCA-IgM的酶联免疫吸附试验(ELISA)进行比较。结果确诊组、疑似组和对照组患儿FQ-PCR检测ebV的阳性率分别为100.00%、81.48%和0.00%。与此对应VCA-IgM的阳性率分别为100.00%、25.93%和0.00%。确诊组ebV DNA的平均拷贝数为1.15×105/m l,疑似组为4.38×104/m l,均明显高于对照组(P<0.05)。结论与VCA-IgM检测方法相比,FQ-PCR检测到ebV感染的阳性率更高,ebV DNA的定量检测可帮助诊断儿科活动性ebV感染,尤其是可疑患儿的临床诊断。

摘要：ＥＢ病毒（ＥＢＶ）是由Ｅｐｓｔｅｉｎ和Ｂａｒｒ从非洲Ｂｕｒｋｉｔｔ淋巴瘤中发现的一种疮疹样病毒，与低分化的鼻咽癌在病原学上有密切关系。用聚合酶链反应方法扩增ＥＢＶ胸苷激酶基因，实验方法简便可靠，引物设计合理，效果满意，为研究胸苷激酶在ＥＢＶ复制和致癌过程中的作用奠定了基础。

摘要：背景与目的:近年研究表明,eb病毒(Epstein-Barrvirus,ebV)潜伏性膜蛋白基因(latentmembraneproteingene,LMP)在鼻咽癌的发生和发展中起着重要作用。本研究着重构建体外基因反义转录系统,研究反义LMPmRNA对ebV转化细胞基因表达的抑制作用。方法:构建和制备反义核酸单链有效的体外转录系统;设计和建立反义原位示踪技术,以探测正、反义链配对互补聚合体的定位;通过对ebV转化细胞系(C1936和B95-8)的反义控制,测定细胞生长的抑制率,观测转化细胞凝集表型;通过对ebV-LMP基因表达的检测和MTT吸收活性的测试,测定转化细胞在基因转录下调之后的生存状态。结果:构建成制备反义RNA的SP6/T7双向启动子的体外基因转录系统。反义工程产物AsLMPmRNA通过胞饮作用掺入转化细胞后,经原位示踪显示,正-反义链聚合物的封闭位点主要在mRNA前体剪接加工成熟的后阶段;转化细胞增殖能力下降(生长抑制率85.5%),细胞转化的凝集表型受抑制,MTT吸收值显著降低,显示被反义控制的C1936和B95-8细胞系的生长受到严重的抑制。应用反义原位示踪系统(antisensetracingsysteminsitu,ATSIS)显示,AsLMPmRNA有特定靶点和抑制效应。结论:本实验所建成的体外反义转录系统所制备的RNA反义工程产物(AsLMPmRNA),有特定的选择靶点作用和高效的生物活性(

摘要：目的建立eb病毒(ebV)抗原表位的理论计算模型并用于其定量预测,为肿瘤免疫的多肽疫苗设计提供理论基础。方法从表位数据库中收集33条ebV抗原表位,使用逐步回归(STR)方法筛选2个对平衡解离常数(KD)贡献较大的结构参数用于表位的结构表征,最后用多元线性回归(MLR)方法建立结构参数与KD的定量构效关系(QSAR)模型。结果该模型具有较好的稳定性(R2=0.637,Q2=0.581)与预测能力(R2test=0.501)。结论此方法可确定表位中各个氨基酸的物理性质对于平衡解离常数的贡献,为表位设计与改造提供直接线索;STR和MLR相结合建模方法具有物化意义明确、易于解释及操作简便易行等优点。

摘要：目的探讨基于eb病毒ebNA基因设计引物的实时PCR在eb病毒DNA检测中的应用以及联合常用方法(Bamh1-W片段)检测在鼻咽癌患者中的诊断价值。方法用两种方法对234例血液标本(包括66例鼻咽癌患者标本)进行eb病毒DNA定量检测,每例样本对细胞内及细胞外分别测定,比较两种方法以及联合检测在各组中的阳性率,观察ebNA法联合Bamh1-W法在鼻咽癌患者中对eb病毒检出率有无提高,方法学的验证采用回归分析及t检验。结果 ebNA法的阳性率(所有样本53.42%,鼻咽癌样本51.52%)低于Bamh1-W法(所有样本69.23%,鼻咽癌样本71.21%),但联合两种方法检测可提高阳性率(所有样本70.94%,鼻咽癌样本72.73%)且在鼻咽癌患者中得到了更大的提高,ebNA法与Bamh1-W法检测标本的相关性R2为0.577,且P0.05,差异无统计学意义。结论联合ebNA法和Bamh1-W法检测eb病毒DNA可提高阳性率且在鼻咽癌患者的检测中阳性率能够得到更大的提高,对eb病毒DNA定量和鼻咽癌的辅助诊断具有一定的意义。

摘要：目的探讨聚丝蛋白基因(FLG)多态性对eb病毒(ebV)感染鼻咽癌(NPC)易感性的影响。方法选择湖州市中心医院介入放疗科2018年6月-2020年12月收治的鼻咽癌患者150例作为研究组,选择同期于医院进行体检健康人80名作为对照组。选择FLG基因rs3126085位点作为目标位点设计特异性引物,离心柱法提取全血基因组DNA,采用聚合酶链式扩增反应扩增目的片段,以测序确定分型结果。结果研究组与对照组FLG基因rs3126085位点研究组GG基因型、G等位基因频率为30.67%、49.00%,高于对照组(P<0.05),两组AA基因型、AT基因型频率比较无统计学差异;GG型鼻咽癌患者ebV-DNA阳性人数占比高于AA/AG型(P<0.05),两组临床分期、化疗疗效比较差异无统计学意义;多因素回归分析结果表明,携带FLG基因rs3126085位点GG基因型和G等位基因均是发生鼻咽癌的独立危险因素(P<0.05)。结论FLG基因rs3126085位点GG基因型、G等位基因频率可能增加了本地区居民对鼻咽癌的易感性,其筛查成本效益有待进一步探讨。

摘要：本文报道用多聚酶链反应方法扩增eb病毒胸苷激酶基因。本研究以Raji细胞和B95-8细胞二种不同细胞株的DNA为模板,引物是根据B95-8细胞的胸苷激酶基因序列设计的,均可得到特异的扩增产物,该产物用内切酶Ncol切割鉴定,酶切片段的长度与预期理论值完全一致。

摘要：eb病毒(ebV)在感染宿主的过程中需要克服宿主免疫系统的防御,因此衍生了一系列干扰人体免疫的策略。ebV感染后会长期潜伏在宿主B细胞中,并对宿主主要组织相容性复合体分子的表达进行干扰,影响宿主的抗病毒免疫。ebV表达的BCRF1蛋白可刺激Th2细胞的产生,BARF1蛋白可诱发α型干扰素等细胞因子的分泌,多种病毒蛋白均可干扰细胞因子网络。同时ebV编码的BHRF1等蛋白可发挥抗凋亡作用。该文就ebV免疫逃避的最新研究进展进行了归纳总结,以期为ebV防控、新型疫苗设计等提供参考。