摘要：采用多重PCR和elisa 2种方法分别对兰州百合中的主要病毒进行检测,以调查田间发病率,对比筛选病毒检测最优的方法.结果表明:通过多重PCR,从带有黄瓜花叶病毒、百合无症病毒和百合斑驳病毒的样品中同时扩增出3条与试验设计大小相符的特异条带.ELLSA检测表明,兰州百合病情含量随种植年限的增加而增加,3年生>2年生>1年生;通过脱毒组培苗的检测,脱毒率随培养代数的增加而增加.对2种不同病毒检测方法的结果进行卡方检测,二者的符合率在90%以上,且多重PCR检测的特异性和敏感性较高.

摘要：目的　制备结缔组织生长因子 (CTGF)抗原 ,建立elisa检测方法。方法　从血管内皮细胞中提取总RNA ,逆转录合成cDNA ,设计特异性引物 ,通过PCR方法扩增CTGFC区 2 4 2～ 349位氨基酸基因 ,插入噬菌体包膜蛋白基因Ⅲ的上游 ,制备CTGF融合蛋白。用纯化后的融合蛋白免疫家兔 ,获得抗体 ,抗体纯化后标记HRP ,建立elisa。结果　成功克隆CTGFC区基因 ,插入表达载体经IPTG诱导后获得分子量为 2 5 0 0 0的融合蛋白 ,免疫学检测证实为CTGF。所得抗体用HRP标记。建立的elisa法检测灵敏度为 2ng/ml,批内及批间平均变异系数为 5 .4 %和 7.5 % ,平均回收率为 10 4 .2 %。血红蛋白浓度在 0～ 5 0mmol/L ,总胆红素在 0～ 15 0 μmol/L ,三酰甘油在 0～ 2 .0mmol/L对测定结果无影响。 2例慢性乙型肝炎病人血标本 ,5例糖尿病肾病、3例肾功能衰竭、3例慢性肾炎尿标本为阳性。结论　CTGF可以作为判断纤维化发生、进展及预后的一个新指标。CTGFelisa检测方法的成功建立 。

摘要：为了建立一种敏感和特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法,对PCV3-Cap蛋白抗原表位预测发现其抗原表位多聚集在C端(羧基端),而N端前33氨基酸为核定位序列。以截断N端前120个氨基酸后的PCV3ORF2序列为靶基因,设计引物。以PCV3阳性病料为模板,PCR扩增截短的ORF2基因,并将其克隆至pET-30a载体构建重组质粒,并转染至大肠杆菌*** BL21感受态细胞,获得重组菌后选择最佳诱导表达条件,采用Ni-NTA亲和层析柱纯化表达产物。以纯化后的重组Cap蛋白作为包被抗原,建立PCV3间接elisa (indirectelisa)诊断方法,并初步用于临床样品检测。结果:从阳性病料中扩增出大小为285bp的PCV3ORF2基因片段,重组质粒经双酶切和测序鉴定构建成功。采用1mmol·L-1 IPTG诱导,在37℃条件下培养6h重组菌,重组蛋白获最佳表达。Western blot结果表明,该重组蛋白与PCV3阳性血清具有较好的反应原性。elisa的最佳包被抗原质量浓度为1μg·mL-1,待检血清最佳稀释度为1∶20,酶标抗体最佳工作浓度为1∶5 000。阳性判定值为S/P≥0.273。批内和批间系数均小于10%,表明该方法具有较好的重复性。PCV2阳性血清用本方法检测为阴性,表明该方法有较好的特异性。检测采集的439份临床猪血清,PCV3抗体阳性检出率为60.59%(266/439)。结果表明,本研究建立了一种快速、简便、敏感、特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法。

摘要：目的:从感染人乳头瘤病毒(HPV)的新鲜宫颈癌组织中扩增HPV16型晚期蛋白L1基因全长,构建原核表达载体,表达并纯化蛋白用于elisa检测。方法:根据基因序列设计一对特异引物,用PCR的方法从宫颈癌组织DNA中获得L1基因,以pet28a为载体构建表达质粒,IPTG诱导表达蛋白,DEAE及葡聚糖凝胶分离纯化目的蛋白,将蛋白包被平底96孔板用于elisa检测。结果:从宫颈癌临床标本克隆到HPV16型L1蛋白编码序列,其原核表达产物纯化后可用于elisa检测。结论:成功获得人有抗原性的HPV16L1蛋白,可用于elisa检测。

摘要：目的探讨elisa检测中全自动加样引起拖带假阳性现象的原因以及所要采取的对策。方法别使用试剂检测筛查血液标本,然后根据检测试剂说明书的要求,在全自动样本处理系统控制微机上编辑程序,程序包括初检和复检。使用一次性探针和永久性探针的污染情况对比,再使用2种标本进行3孔复检,在进行判断是否为强阳性所引起的拖带污染现象。结果整个检测过程中,以HIV检测为例所检测的7324份血液检测中出现拖带假阳性现象的为2例,而2013年1月—2014年5月间共检测血液标本66085份,没有出现拖带假阳性现象。结论一次性加样探针的使用能够很好的减少甚至杜绝拖带假阳性污染现象的发生,在检测过程中由于不同的厂家的试剂有所区别,在设计加样参数时应该遵循科学合理的原则,检测仪器要定期进行检验维修,校准,同时对于血液标本要严格质量控制,提高检测的准确性和安全性,使得全自动检测设备的优势充分。

摘要：用自制活化长碳臂生物素标记马抗银环蛇毒抗体进行夹心ＡＢＣ—ＥＬＩＳＡ测试，所获参数为：最小检出量０．２５ｎｇ／ｍｌ；标准曲线最适检测范围０．２５～２５０ｎｇ／ｍｌ；批内变异＜８％，批间变异＜１６％，不同浓度回收率为７８～８９％；与同科眼镜蛇毒无交叉反应。作者从法医学鉴定的实际需要出发，利用正交设计研究了各种因素对检测的影响，结果示：蛇咬死亡动物血液和肾脏为最佳检材，最长检出时间可达３０天。本方法常规应用可靠性强。

摘要：目的对elisa检测大肠埃希菌方法条件进行优化研究.方法以大肠埃希菌为对象,通过Box-Behnken设计星点响应面实验进行优化实验.结果优化后elisa检测条件:抗原包被浓度为6.25μg/m L,抗原包被最佳时间为7 h,抗体稀释度最佳为1∶625 0,大肠埃希菌elisa检测OD值为2.12.结论经实验得证,通过星点响应面实验方法进行大肠埃希菌elisa检测条件优化,结果合理有效,优化效果良好.

摘要：为了给人参果病毒检验及抗病性研究提供支持,对人参果采用elisa和RT-PCR两种检测方法对8份田间材料中的马铃薯M病毒(PVM)、番茄花叶病毒(ToMV)和烟草花叶病毒(TMV)进行检测,对比筛选病毒检测方法。结果表明,elisa法检测PVM的阳性检出率为87.5%;ToMV为37.5%,疑似率为12.5%;TMV为37.5%。通过RT-PCR检测体系,从人参果样品中分别扩增出与试验设计大小相符的特异条带,PVM阳性检出率为100%,ToMV为50.0%,TMV为37.5%,检测灵敏性和准确性更高,检测结果符合率在87.5%以上。对扩增阳性产物进行凝胶回收测序,确定为目标条带。

摘要：根据鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的gB基因序列和表达载体pBV221的多克隆位点,设计了1对引物。以ILTV疫苗株基因组为模板,应用PCR扩增出gB基因片段,然后将其定向克隆于原核表达载体pBV221中,构建了重组质粒pBV-gB。重组质粒转化到受体菌DH5α中,得到阳性重组菌株DH5α(pBV-gB)。该菌株在温控诱导下,SDS-PAGE电泳可见表达的特异蛋白。elisa检测证明,表达的蛋白具有较好的反应原性。

摘要：DSX自动elisa工作站可以应用在实验室的elisa检测方面，包括临床诊断、分析实验的设计、ADME（吸收、分布、代谢、排泄）毒力分析和药物发现，等等。工作站提供了所有的elisa的必要步骤，包括吸光率终点检查、平板清洗、控温摇床培养，等等。