摘要：为建立简单快速的蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)基因间重复共有序列pcr(eric-pcr)的分子分型方法,该研究以*** 63303的基因组DNA为模板,并采用正交设计L16(45)对影响eric-pcr反应体系的五个因素(模板DNA、Mg2+、dNTP、TaqDNA聚合酶、引物)在四个浓度水平上进行优化,并通过单因素试验确定最佳退火温度,最后以优化后的反应体系对50株***分离株进行eric-pcr分子分型和聚类分析验证其稳定性和分型效果。结果显示应用建立的eric-pcr反应体系对50株分离株扩增均得到了9-17条、大小在200-4000 bp之间的条带,并可将其分为47个型,且分辨力达到0.996,具有较高稳定性和分辨能力。表明eric-pcr技术对***分型,具有简便和分辨力高等优点,可用于食源性***分离株的多样性研究。

摘要：目的利用eric(enterobacterial repetitive intergenic consensus)-pcr技术,设计引物,特异性检测嗜酸乳杆菌。方法以本实验室保藏的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)SYP-B2340基因组DNA为模板,通过四因素三水平正交试验,优化嗜酸乳杆菌eric-pcr反应体系,对所获得的pcr条带进行测序和分析,进一步设计特异性引物,实现对嗜酸乳杆菌的特异性鉴别。结果通过四因素三水平正交实验,成功优化eric-pcr反应条件;根据eric-pcr片段,设计三对特异性引物,可在多种混合基因组DNA中灵敏鉴别出嗜酸乳杆菌。结论基于eric-pcr设计的特异性引物,可简便、快速的鉴定嗜酸乳杆菌。

摘要：eric序列是近年来发现的存在于原核生物基因组中一类短的重复序列。该序列在染色体上的分布和拷贝数具有种间的特异性,根据序列中心高度保守的44 bp的eric核心序列设计反向引物,可扩增出反映细菌基因组结构特征的谱带。由于eric-pcr快速简便,图谱重复性好,能用于细菌分类鉴定、环境监测、污染治理以及人和动物肠道菌群结构研究等方面。

摘要：以 Ｅ Ｒ Ｉ Ｃ（ 肠杆菌基因间共有重多序列） 序列设计的特异引物对３ 株大肠杆菌、３ 株软腐欧氏杆菌、２ 株草生欧氏杆菌、１ 株梨火疫欧氏杆菌、１ 株催娩克氏菌、１ 株阴沟肠杆菌和９ 株具有降酚能力的细菌等２０ 种细菌的基因组 Ｄ Ｎ Ａ 进行 Ｐ Ｃ Ｒ 分析．每种菌株均存在数目不等的各自独特的带型，能够区分同一种类中极为相近的菌株．经多次重复，各特异性扩增的主要带型能重复稳定出现．聚类分析的结果表明，供试菌株多数按照分类地位归到相应的组中．９ 种具有降酚能力的细菌中，２ 种分离自处理焦化废水池活性污泥，７ 种来自土壤样品． Ｅ Ｒ Ｉ Ｃ Ｐ Ｃ Ｒ 指纹图显示，前２ 种属于一类，都有一条大小约１ ．１ ｋｂ 的主带，其它７ 种土壤中分离出来的细菌除其中１ 种有１ 条约１ ．２ ｋｂ 大小的主带外，其余６ 种都有１ 条大小约１ ．４ ｋｂ 的带．聚类分析将从土壤中分离出来的细菌归为３ 种不同的类型． Ｅ Ｒ Ｉ Ｃ Ｐ Ｃ Ｒ 可以从分子水平对细菌基因组进行快速指纹图分析。

摘要：采用eric-pcr和RAPD 2种方法对嗜水气单胞菌2009年分离菌株及实验室保存菌株共83株进行分子分型。参考相关文献设计并合成引物,分别进行pcr扩增及琼脂糖凝胶电泳,电泳结果经Quantity One软件数值化后利用SPSS软件进行聚类分析。结果显示,除少数分离株外,使用2种方法对大多数菌株分型,均能得到多态性较好的指纹图谱。RAPD的AP12H引物能扩增出1～12个200～4 500bp之间的条带,可将嗜水气单胞菌分离株分为4群、12类。eric-pcr能扩增出4～16个100～5 800bp之间的条带,将嗜水气单胞菌分离株分为4群、17类,同一年代、同一地域分离株分别有聚成一类的趋势。2种分型方法均体现很好的分型能力。但eric-pcr分型与RAPD分型相比,重复性和稳定性更好,分辨力更高,且具备RAPD不要求模板序列已知而直接进行扩增的优点,更适合嗜水气单胞菌的分型研究。

摘要：为解决目前应用于鉴别动物双歧杆菌的方法的用时长、操作复杂、实验环境低适配性等缺点,开发了一种基于eric-pcr技术设计特异性引物探针以靶向鉴别、检测动物双歧杆菌的方法。以动物双歧杆菌HP-B1124基因组DNA为基础,优化动物双歧杆菌HP-B1124的eric-pcr反应条件,对eric-pcr片段逐一回收并进行测序,针对测序结果设计两对特异性引物探针,对两对引物探针设计结果的准确性、特异性、可检测基因组DNA的含量限度、普适性进行检验,并运用所设计的两对特异性引物探针检验市售公示配方中含有动物双歧杆菌的产品。本研究设计的两对特异性引物探针可简单、快速、靶向的用于动物双歧杆菌的鉴定。此方法优化了目前相对传统的动物双歧杆菌纯培养及平板计数鉴定方法,一定程度上解决了SNP基因分型技术及实时荧光定量pcr法等方法在鉴定动物双歧杆菌方面对实验设备及试剂的高要求,具有成本低、特异性强的特点,有较为广阔的市场开发前景。

摘要：肠道细菌基因间重复序列(enterobacterial repetitive intergenic consensus,eric)是主要存在于肠道细菌的一类基因间重复序列。eric-pcr技术是利用eric核心的高度保守序列设计引物进行pcr,因此,通过这一技术扩增基因组DNA,构建DNA指纹图谱,能广泛用于肠道微生物动态分析、微生物分类鉴定等方面的研究。

摘要：从12例疑似副猪嗜血杆菌病患病猪的关节液和腹膜中分离2株革兰氏阴性细小杆菌,经pcr鉴定,确定分离的2株菌为副猪嗜血杆菌.根据肠杆菌基因间保守重复序列(EnterobacterialRepetitive Intergenic Consensus,eric),设计一对特异性引物,应用eric-pcr技术研究了副猪嗜血杆菌2个分离菌株的指纹图谱.结果表明,2个分离株的pcr指纹图谱基本一致,应为同一基因型;与已知15个标准血清型指纹图谱相比较可分辨出2分离株可能为血清5型.该研究可为副猪嗜血杆菌的流行病学调查及基因分子分型快速诊断方法提供基础.

摘要：eric序列是近年来发现的存在于原核生物基因组中一类短的重复序列。该序列在染色体上的分布和拷贝数具种间特异性 ,根据序列中心高度保守的 4 4bp的eric核心序列设计反向引物 ,可扩增出反映细菌基因组结构特征的谱带。由于eric pcr快速简便 ,图谱重复性好 ,并可作为分子标记用于细菌的分类鉴定 ,所以 ,该方法已广泛应用到了科研和生产实践中。

摘要：传统的微生物分类鉴定是基于微生物的表型特征如生长、营养、生理生化、血清型、噬菌体分型等,然而由于微生物对内外环境变化很敏感以及表型容易变异,因此往往导致错误的分类结果.随着分子生物学的发展,一些基于对微生物遗传物质进行分类鉴定的分子生物学方法取得很大的进展如PFGE、RAPD-pcr、REA、RFLP、eric-pcr等.这些方法克服了传统方法的缺陷,在微生物的分类鉴定中发挥越来越大的作用.eric是主要存在于肠道细菌基因间的重复序列,可以形成稳定的茎环结构,定位于基因组内可转录的非编码区域或者与转录有关的区域.eric-pcr技术是利用eric核心的高度保守序列设计引物进行pcr,因此通过该技术扩增基因组DNA,构建DNA指纹图谱,建立快速检测的分子分型平台,能广泛用于微生物分类鉴定、环境微生物动态分析等方面的研究.