摘要：由猪产肠毒素大肠杆菌(etec)引起的仔猪腹泻是规模化猪场最常见的疾病之一。目前国内和国际上制备etec疫苗的靶基因多为其黏附素基因K88ac、K99。本试验通过分析etec K88ac、K99黏附素蛋白的生物学信息,将抗原表位进行组合,设计了一种同时含有K88ac、K99基因的多表位重组疫苗载体。首先应用ProParam、SOPMA和GOR软件分析K88ac、K99蛋白的理化特性及二级结构,应用IEDB与ABCpred软件预测二者的B细胞抗原表位,应用RANKPEP软件预测Th细胞表位,应用IEDB与NetMHC-4.0软件预测CTL细胞表位;然后将预测的B细胞、Th细胞和CTL细胞抗原表位加上接头序列,按照一定顺序进行组合,分别设计多表位连接多肽Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ;最后通过分析抗原性、致敏性,筛选抗原性最强的连接多肽,并对其进行表征。结果显示:共筛选出9个抗原表位,按照不同的排列组合获得了3种连接多肽,其中连接多肽Ⅱ抗原性最强,为0.906 8;应用AllerTOP v. 2.0在线工具对连接多肽Ⅱ进行过敏性预测,发现其没有过敏性;应用ZpGJn4在线工具对连接多肽Ⅱ进行三维建模,发现其结构表位暴露性较好,易与抗体结合,在蛋白分子构象上符合表位设计要求。将该多表位肽的氨基酸序列按照乳酸菌密码子嗜好性反向翻译为核苷酸序列,随后插入pET28a载体中获得了p ET28a-KT质粒。结果表明,构建的连接多肽Ⅱ适合作为多表位疫苗的备选载体蛋白。多表位肽的设计及pET28a-KT质粒的获得为下一步构建表达etec多表位抗原的重组乳酸菌提供了技术支撑。

摘要：本试验旨在研究复合纤维和植物精油联合添加对产肠毒素大肠杆菌(etec)攻毒仔猪生长性能、抗氧化能力和免疫功能的影响。试验采用单因素设计,选取28头(28±1)日龄的健康“杜×长×大”断奶仔猪,根据体重[(7.93±0.44)kg]相近原则,随机分为4个组,分别为对照组(饲喂基础饲粮)、攻毒对照组(饲喂基础饲粮)、抗生素组(饲喂基础饲粮+75 mg/kg金霉素+25 mg/kg维吉尼亚霉素+50 mg/kg喹烯酮)和复合纤维+植物精油组(饲喂基础饲粮+0.5%菊粉+0.5%微晶纤维素+200 mg/kg植物精油),每组7个重复,每个重复1头仔猪,单笼饲养。试验期25 d。于试验第22天上午,对仔猪进行空腹称重后,各试验组试猪一次性灌服10 mL/kg BW大肠杆菌(6×10^(9) CFU/mL)悬浮液,而对照组采用相同方式灌服生理盐水。结果表明:1)与对照组相比,攻毒对照组仔猪平均日增重(ADG)降低了7.19%(P>0.05),料重比(F/G)提高了5.59%(P>0.05),血清丙二醛(MDA)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量显著提高(P0.05),血清总抗氧化能力(T-AOC)以及IgA和IL-4含量显著提高(P<0.05),血清和空肠黏膜MDA含量显著降低(P<0.05),空肠黏膜IL-6、Toll样受体4(TLR4)和NF-κB p 65 mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。3)与抗生素组相比,复合纤维+植物精油组仔猪血清IgA含量显著提高(P<0.05),空肠黏膜IL-1β、TNF-α、CD14、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB p 65和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。综上所述,复合纤维和植物精油联合添加能显著抑制大肠杆菌诱导的仔猪氧化应激和炎症反应,改善仔猪生长性能,具有替代抗生素的潜力。

摘要：目的产肠毒素大肠杆菌(Enterototxigenic,Escherichia Coli,etec)是造成人和动物腹泻的主要病原之一,也是造成新生乳用犊牛腹泻的主要原因,一株etec可能产生一种或者多种肠毒素。根据产肠毒素大肠杆菌产生的两种主要毒素的基因序列,设计了两对引物,建立多重PCR方法。该方法仅用4.5小时即可检测出导致犊牛腹泻的产肠毒素大肠杆菌菌株,具有敏感度高、特异性强和检测速度快等特点。本试验的目的是用所建立的多重PCR方法来确定etec在导致犊牛腹泻中的作用。采用该方法对乳用犊牛的203个腹泻样品进行了检测,结果,用传统的分离培养方法得到的203株典型大肠杆菌中有135株为etec;其中LT阳性为105株,ST阳性为126株,LT+ST阳性的为96株,阳性率为66.5%。而采用直接从粪样中提取PCR模板的方法进行PCR,检测到146个犊牛粪样为etec阳性,其中LT阳性为112株,ST阳性为137株,LT+ST阳性为103株,阳性率为71.9%,明显高于传统的检测方法;并且所检测到的146个etec阳性的犊牛粪样完全包含用传统的分离培养方法得到的135个阳性粪样,且基因分型结果相同。

摘要：研究报道MUC13基因第2内含子的插入／缺失突变与etec F4导致的仔猪腹泻病密切相关，但该突变位点是否会对基因表达和经济性状（如一般抗痛力、生产性状及繁殖性能等）造成影响还有待评估。本试验通过PCR方法检测大白猪群体中该突变位点的多态性，并分析其对大白猪MUC13基因mRNA表达水平、部分重要细胞因子水平（IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IFN—γ、TGF-β；及TNF—α）、生产性状及繁殖性能的影响，以探究将该位点作为抗性遗传标记应用于抗病育种实践的可行性。结果表明：该位点在大白猪群体中存在3种基因型；不同基因型个体间组织inRNA表达水平、重要细胞因子水平、生产性状及1～4胎繁殖性能（总产仔数、产活仔数和断奶仔猪数）差异均不显著（P〉0．05）。综上所述，将MUC13基因第2内含子插入／缺失突变作为大白猪抗性遗传标记进行分子选育时，不会对机体基因表达和重要经济性状造成显著影响。本研究为将该突变位点作为大白猪抗仔猪腹泻分子选育遗传标记的可靠性提供了一定的理论依据。

摘要：目的:通过生物信息学及蛋白分析软件等,寻找etec K88、K99菌毛蛋白的抗原表位。方法:通过生物信息学技术、DNAStar Protean蛋白分析软件及网络共享软件对etec K88、K99菌毛蛋白抗原性相关的参数进行预测分析,从而设计etec K88、K99菌毛蛋白的抗原表位多肽;采用腹腔注射的方式将合成的抗原表位多肽免疫小鼠,用ELISA法检测血清中产生的抗体,并对免疫小鼠进行了攻毒试验。结果:多肽免疫小鼠后均能诱导抗体产生,攻毒试验表明合成肽对小鼠具有保护作用。结论:成功预测了抗原表位,合成的表位多肽具有较好的抗原性。

摘要：为建立检测产肠毒素大肠杆菌(etec)耐热型肠毒素STa和STb的纳米金PCR方法,根据etec耐热型肠毒素STa和STb的基因序列,用Primer 5.0软件设计了2对特异性引物,优化得到最佳反应条件,并进行灵敏度和特异性的测试.实验结果表明:本文所建立的体系均能扩增到目的条带,灵敏度为47.5 cfu/mL,且特异性良好;所建立的纳米金PCR方法在人工染菌实验中也获得了较高的灵敏度和特异性.

摘要：目的建立基于分子生物学技术结合传统分离方法检测5种致泻性大肠埃希菌(DEC),并应用于浦东新区腹泻人群的DEC监测,从而构建DEC感染病原谱,以了解浦东新区感染性腹泻患者DEC的感染情况。方法从GenBank基因数据库中筛选5种DEC毒力基因序列,合成引物探针,优化设计TaqMan实时荧光PCR法结合传统分离方法,最终获得单克隆菌株。应用该方法对2014年的11家腹泻监测点1 846份粪便拭子进行DEC检测。结果 1 846件粪便拭子中DEC总阳性率为14.90%(275/1 846),其中检出致病性大肠埃希菌102株(5.53%),产毒性大肠埃希菌102株(5.53%),侵袭性大肠埃希菌3株(0.16%),聚集性大肠埃希菌68株(3.68%)。结论 Taq Man实时荧光聚合酶链反应(PCR)结合传统分离方法分离DEC体现出非常高的准确性和检测效率,同时避免了志贺菌的漏检;为期1年的监测数据显示,DEC已成为细菌性感染性腹泻病原谱中首位病原,其组成结构呈多样性及显著的季节性特点。

摘要：沙特国际石化公司（Sipchem）于2011年1月10日宣布，决定将其建设醋酸乙酯装置的工程、设计、施工（LSTK）合同授于韩国etec工程建设公司。