摘要：Mdm2 是瘤 suppressor p53 的关键否定管理者，使它成为为反癌症药设计的一个吸引人的目标。我们最近通过它和 polycomb 组(PcG ) 的几蛋白质的直接相互作用在基因压抑识别了 Mdm2 的一个新角色家庭。PcG 蛋白质形成 polycomb 压抑的建筑群 PRC1 和 PRC2。PRC2 (经由 ezh2 ) 调停 histone 3 离氨酸 27 (H3K27 ) trimethylation，和 PRC1 (经由 RING1B ) 调停 histone 2A 离氨酸 119 (H2AK119 ) monoubiquitination。两个中华人民共和国主要支持一个协议和 transcriptionally 沉默的染色质结构。我们发现 Mdm2 调整类似于独立于 p53 的 PRC2 的基因表示侧面。而且， Mdm2 支持鼠科的导致的 pluripotent 干细胞和人的 stemness 间充质的干细胞，和支持瘤房间的幸存。Mdm2 被招募由 PRC2 成员和 histone methyltransferase ezh2 指向基因倡导者，并且提高中华人民共和国依赖者压抑的染色质修正，明确地 H3K27me3 和 H2AK119ub1。Mdm2 也与 PRC1 蛋白质 RING1B 在基因压抑合作， H2AK119 ubiquitin ligase。这里，我们在染色质动力学并且在干细胞显型讨论 Mdm2 的这些 p53 独立的功能的可能的含意。我们建议 Mdm2 的 p53 独立的功能应该为癌症药设计被考虑。到目前为止，临床上测试的 Mdm2 禁止者的多数指向它的绑定到 p53，但是不影响这里描述的 Mdm2 的新功能。不管多么当指向 Mdm2 的 E3 ligase 活动时，许多它的 oncogenic 活动可能成为 druggable。

摘要：背景与目的已有的研究证明CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associated 9)系统是一种能够在哺乳动物细胞中高效操作的新型基因编辑技术,应用人工设计的向导RNA(single-guide RNA,sgRNA)介导外源表达的Cas9蛋白与靶点DNA特异性结合以实现对基因组DNA的切割,被切割后的基因组DNA通过非同源重组或同源重组的方式进行修复,从而实现基因的敲除、或者外源基因的敲入等目标。本研究的目的是应用CRISPR/Cas9技术构建小鼠肺部ezh2基因敲除的动物模型。方法针对ezh2基因的编码区,设计两个靶向ezh2基因Exon3和Exon4的sgRNA,通过慢病毒包装、感染细胞、SURVEYOR assay等一系列体外实验,验证所设计的sgRNA的有效性。应用支气管插管的方式把慢病毒灌注到小鼠肺部,利用免疫组化方法和qRT-PCR进行检测。结果 NIH-3T3细胞的体外实验结果验证了实验所设计的sgezh2能够有效地在体外细胞系中介导Cas9切割靶DNA;小鼠支气管插管实验及肺部组织免疫组化和qRT-PCR方法检测ezh2基因敲除的效率,发现实验组小鼠肺部组织ezh2表达明显降低。结论本研究成功设计了两条能够敲除ezh2功能的sgRNA,并应用CRISPR/Cas9技术成功建立了肺部ezh2基因敲除的小鼠模型,为研究ezh2的功能和作用机制提供了有效的动物模型。

摘要：目的人工设计制备多价ezh2肿瘤相关抗原肽,并鉴定其抗原特性。方法设计合成编码多价ezh2肿瘤相关抗原肽的DNA序列,克隆入原核表达载体p ET-30a(+)中,构建含4个ezh2肿瘤相关抗原肽段(Aa120-128、Aa165-174、Aa291-299、Aa735-742)的重组多价抗原肽原核表达质粒p ET-30a(+)-ezh2-antigen,转化*** BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,用Ni-NTA树脂在变性条件下对重组多肽进行亲和层析纯化,Western blot分析重组多价ezh2肿瘤相关抗原肽的抗原特性。用重组多价ezh2肿瘤相关抗原肽免疫大耳白兔,制备多克隆抗体,间接ELISA法检测血清中抗体效价,Western bolt分析多抗的特异性。结果重组原核表达质粒p ET-30a(+)-ezh2-antigen经酶切及测序证实构建正确;表达的重组多价ezh2肿瘤相关抗原肽表观相对分子质量约4 300,主要以包涵体形式存在;纯化的多肽纯度不低于90%,浓度为0.5 mg/ml,且能被兔抗ezh2多抗和兔抗His标签多抗有效识别和结合;纯化的多价ezh2肿瘤相关抗原肽能在动物体内高效诱导抗体生成,抗血清效价为1∶64×104,且能特异性识别和结合PC3人前列腺癌细胞中表达的ezh2蛋白。结论成功制备了一种多价ezh2肿瘤相关抗原肽,该多价抗原肽相对分子质量虽小,但抗原肽密度高,可能具有更强的肿瘤相关抗原的活性,具有重要的应用前景。

摘要：目的探讨mi R26a靶向ezh2抑制肝癌Hep G2细胞的增殖活性的影响并探讨其可能的分子机制。方法设计合成mi R26a mimic,将细胞分为转染试剂对照组(mock)、阴性对照组(control)和mi R26a mimic组,采用Real-time PCR检测转染后细胞中mi R26a的表达水平,MTT检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,双荧光素酶报告基因系统检测mi R26a与ezh2的靶向关系,Western blot检测各组细胞中ezh2蛋白的表达。结果 MTT分析及流式细胞术的检测证实过表达mi R26a能够抑制肝癌细胞的增殖效应,促进肝癌细胞的凋亡,双荧光素酶报告基因系统以及Western blot的结果均证实mi R26a能够显著下调ezh2在蛋白水平的表达。结论 mi R26a能够显著抑制肝癌Hep G2细胞的增殖活性,并且与ezh2之间存在良好的靶向关系。

摘要：目的探讨干扰沉默ezh2基因对肾癌ACHN细胞细胞株的增殖、凋亡及mTOR信号通路的影响。方法设计针对ezh2基因干扰RNA(shRNA),经脂质体将转染ezh2 shRNA入肾癌ACHN细胞,应用RQ-PCR及Western blot鉴定其干扰效果,MTT法绘制细胞生长曲线,TUNEL检测细胞凋亡的变化,Western blot检测组蛋白H3K27三甲基化水平(H3K27me3),凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Procaspase-3及mTOR信号通路蛋白mTOR、磷酸化mTOR蛋白(pmTOR)、磷酸化P70核糖体蛋白S6激酶(phosphorylation P70 ribosomal protein S6 kinase,p-P70S6K)的变化。结果ezh2 shRNA转染ACHN细胞48 h后,ezh2的m RNA和蛋白表达均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),ezh2 shRNA组细胞增殖率明显低于Neg shRNA组和Control组(P<0.05),ezh2 shRNA组细胞的凋亡率为(45.57±5.26)%,而Neg shRNA组和Control组分别为(3.24±1.37)%、(1.65±0.94)%,差异有统计学意义(F=48.62,P<0.05)。促进凋亡蛋白Bax表达增强,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达减弱,凋亡执行蛋白前体Procaspase3减少。H3K27me3水平较Control组明显下降,而检测mTOR通路蛋白发现mTOR总蛋白未见明显下降,但是活性形式的磷酸化p-mTOR、p-P70S6K表达下降。结论干扰沉默ezh2基因可抑制肾癌ACHN细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是调节组蛋白H3K27me3水平变化,特异性抑制mTOR信号通路的活性。

摘要：目的:通过慢病毒介导的ezh2-shRNA干扰载体,沉默人卵巢癌SKOV3细胞中果蝇zeste基因的人类同源物(ezh2)的表达,探讨靶基因ezh2对卵巢癌细胞增殖的影响。方法:设计含ezh2基因序列的shRNA慢病毒干扰载体,转染人卵巢癌SKOV3细胞株;利用CCK-8比色法检测ezh2基因沉默后对SKOV3细胞增殖的影响;利用RT-PCR、Western blot分别检测ezh2、PCNA mRNA及蛋白的表达情况。结果:ezh2-shRNA载体感染SKOV3细胞后,可显著抑制SKOV3细胞生长(P<0.05),并下调ezh2、PCNA mRNA和蛋白的表达(P均<0.05),而在空白对照组和空载体转染组中,无抑制作用。结论:沉默ezh2基因可抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖,可能是一种新的基因治疗方法。

摘要：目的探讨ezh2、PCNA在金黄地鼠颊黏膜癌前病变藓化饮治疗前后的表达及意义。方法按完全随机设计方法,将动物分为空白对照组5只和实验组50只。实验组用于建立金黄地鼠颊黏膜癌前病变模型,其中30只为藓化饮治疗组;10只为癌前病变对照组;10只为生理盐水治疗对照组。治疗8周时,各组同步取材。采用免疫组化方法,光镜下观察ezh2、PC-NA在金黄地鼠颊黏膜癌前病变藓化饮治疗前后的表达情况。结果癌前病变对照组ezh2、PCNA高表达率与空白对照组相比,有显著性差异(P0.05);生理盐水治疗对照组ezh2、PCNA高表达率与藓化饮治疗组相比,有显著性差异(P<0.05)。结论中药藓化饮对金黄地鼠颊黏膜癌前病变具有明显的逆转作用。