摘要：目的:设计并构建erbb2的小干扰RNA,检测其对erbb2蛋白表达的干扰效果,并检测其对乳腺癌细胞ZR75-1生长的影响。方法:设计2条针对erbb2的siRNA,并克隆到siRNA表达载体pSliencer 2.1-U6 neo上。经酶切和测序证明构建成功后,将其与pcDNA3-FLAG-erbb2共转染于293T细胞,以及单转siRNA于乳腺癌SKBR3和ZR75-1细胞,通过Western blot分别检测siRNA对外源和内源erbb2的干扰效果。通过结晶紫实验研究siRNA对ZR75-1生长的影响。结果:Western blot证明构建的两条erbb2 siRNA均能有效抑制外源和内源erbb2蛋白的表达,并抑制乳腺癌ZR75-1细胞的生长。结论:构建的siRNA能有效地抑制erbb2蛋白的表达并抑制ZR75-1细胞的生长。

摘要：目的构建含F／2A序列的抗P185^erbb2人鼠嵌合抗体慢病毒表达载体，观察其在293T细胞中的表达。方法用具有自我剪切能力的弗林蛋白酶（Furin）／口蹄疫病毒2A多肽（F/2A）连接人鼠嵌合抗体的重链和轻链，形成一个开放阅读框（ORF），插入慢病毒表达载体pWPI，构建重组抗P185神睨全长人鼠嵌合抗体表达载体pWPI／H-F2A—L。以已构建的慢病毒表达载体pWPI／H-IRES-L为对照质粒。应用磷酸钙沉淀法将慢病毒载体3质粒系统共转染入293T细胞进行包装，测定病毒滴度。再感染293T细胞，荧光显微镜下观察GFP的表达和转染效率，RT—PER、ELISA方法分别检测嵌合抗体mRNA和蛋白的表达。结果经测序鉴定，pWPI／H—F2A—L与预期设计一致；pWPI／H—F2A—L组的病毒滴度为4．3×10^5TU／ml，而pWPI／H—IRES—L组的病毒滴度为3．5×10^5TU／ml；两组重组慢病毒的转染效率分别为87．68％和79．08％；两组重组慢病毒感染293T细胞后，都有嵌合重链和嵌合轻链的表达，由F／2A介导的嵌合抗体的表达水平要高于由IRES介导的嵌合抗体。结论成功构建了含F／2A序列的抗P185^erbb2人鼠嵌合抗体慢病毒表达载体，为今后抗P185^erbb2工程抗体的研究奠定了基础。

摘要：背景：对确诊患乳腺癌的妇女行全身辅助治疗是基于其肿瘤复发的危险。进行危险评估时，通过乳腺X线筛查发现的肿瘤发生复发的危险与其他方法发现的大小相似的肿瘤相同。目的：对乳腺X线筛查或其他方法发现的女性乳腺癌患者的复发危险和生存率进行比较。设计、地点及患者：对乳腺X线筛查出的肿瘤和其他方法发现的肿瘤进行回顾性研究，比较其临床、组织病理学和生物学特性。从芬兰肿瘤登记处（Finnish Cancer Registry）检出1991年或1992年诊断患有乳腺癌的妇女（n=2842）。中位随访时间为9．5年。应用免疫组织化学或原位杂交法对肿瘤的生物学特性进行肿瘤组织微矩阵分析，包括erbb2、TP53、MK167表达和erbb2扩增数据。主要观察指标：影响乳腺癌远期复发和10年生存率的潜在危险因素的单变量分析和多变量分析。结果：在1983例患单侧浸润性乳腺癌的妇女中，1918例有肿瘤直径数据。通过乳腺X线筛查发现的肿瘤患者与其他方法发现的肿瘤患者比较，前者10年远期无病生存率更高（肿瘤≤10mm[n=386]：92％比85％[P=0．04]；肿瘤11～20mm[n=808]：88％比76％[P〈0．001]；肿瘤21～30mm[n=409]：86％比63％[P=0．008]；肿瘤〉30mm[n=315]：68％比50％[P=0．12]）。在包括各种肿瘤生物学因素的Cox多变量模型中，其他方法发现的肿瘤患者发生远期复发的相对风险比（hazard ratio[HR]，1．90；95％可信区间，1．15—3．11）显著高于乳腺X线筛查发现的肿瘤患者（P=0．01）。通过乳腺X线筛查确诊乳腺癌是降低远期复发相对HR的独立预后变量。这种作用相当于甚至超过肿瘤直径缩少1cm的作用（HR，1．20；95％可信区间，1．10～1．31）。结论：通过乳腺X线筛查发现的肿瘤与其他方法发现的大小相似的肿瘤比较，前者预后更好。在评估远期转移危险时必须考虑肿瘤检测方法，否则就会高估经乳腺X线筛查确诊的肿瘤患者发生远期转移的危险。

摘要：将小分子干扰RNAs（siRNAs）传递至细胞内是其应用于临床治疗的关键障碍。设计了鱼精蛋白-抗体的融合蛋白传递siRNA至感染HIV或转染HIV胞膜的细胞。该融合蛋白（F105-P）设计为将鱼精蛋白编码序列连接到HIV-1胞膜抗体的重链Fab段的C末端。与F105-P相连的siRNAs仅在表达HIV-1胞膜的细胞内诱导基因沉默化。此外，针对HIV-1衣壳基因gag的siRNAs在受HIV感染但难以转染的初始T细胞中能抑制HIV复制。大鼠肿瘤内或静脉内注射与F105-P相连的siRNAs可靶向表达HIV胞膜的B16黑色素瘤细胞，对正常组织或胞膜阴性的B16细胞无此作用；注射与靶向c-myc、MDM2以及VEGF的siRNAs相连的F105-P可抑制表达胞膜蛋白的皮下B16肿瘤。另外，erbb2单链抗体与鱼精蛋白融合可特异性地传递siRNAs进入表达erbb2的肿瘤细胞。