摘要：为了对牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)进行准确定量检测,针对BRSV f基因设计特异性引物,构建pMD19T-BRSV-gf重组质粒,以其为模板优化反应条件及反应体系,建立TB GreenⅡ荧光定量PCR方法并应用于临床BRSV检测。结果显示,针对BRSV f基因建立的TB GreenⅡ荧光定量PCR方法标准曲线线性关系良好,相关系数为0.9952;灵敏度高,BRSV最低检测限达3.9×10^(1) copies/μL;特异性良好,可特异性检测出BRSV,对牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒的扩增呈阴性;重复性好,批内和批间重复性试验变异系数均小于2%。对50份临床样品进行检测,荧光定量PCR对BRSV的阳性检出率(26%)明显优于常规PCR方法(14%)。结果表明针对BRSV f基因建立的TB GreenⅡ荧光定量PCR检测方法适合BRSV的临床检测。

摘要：根据GenBank发表的犬瘟热病毒(CDV)核酸序列[CDV5804(AY386315)、CDV01-2689(AY649446)、CDV A75-17(Af164967)、CDV 00-2601(AY443350)、CDV 98-2645(AY445077)、CDV 98-2654(AY466011)和CDV Onderstepoort(Af378705)],分别设计合成扩增CDVH基因和f基因的引物。采用RT-PCR技术扩增狐源CDV泰安株(CDV-fOX-TA)H基因和f基因,分别将H基因与f基因克隆进pMD18-T载体,进行序列分析。结果表明,CDV-fOX-TA株H基因有1个ORf,全长1824bp,编码607个氨基酸,与CDV Onderstpeort、CDV Convac的同源性分别为89.2%和90.6%,与CDV A75-17的同源性为98.6%,与CDV LP的同源性为98.7%。CDV-fOX-TA f基因有1个ORf,全长1889bp,编码662个氨基酸,CDV f蛋白信号肽区域易发生突变,但f0蛋白裂解点(RRQRR)、13个半胱氨酸残基、4个潜在的天冬氨酰糖基化位点和2个疏水区都高度保守。CDV H基因和f基因系统发生分析表明,CDV-fOX-TA与CDV A75-17和CDV LP亲源关系较为密切。

摘要：扩增禽4型副黏病毒(Avian paramyxovirus type 4,APMV-4)新疆野鸭源分离株APMV-4/Pintail/CH(XJ)/01/2016的f基因,并构建原核表达载体。参考GenBank上公布的APMV-4序列,通过DNAStar设计f基因特异性引物,以APMV-4/Pintail/CH(XJ)/01/2016基因组RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增f基因编码区,连接于pMD19-T载体,用BamHⅠ和HindⅢ酶切原核表达载体pET-30a重组质粒,将酶切产物克隆至pET-30a多克隆位点上,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,构建f基因原核表达载体,并对阳性重组质粒进行PCR和测序鉴定。结果显示,扩增出的片段大小为1701 bp,经测序鉴定该扩增片段为f基因全长,与GenBank中收录的APMV-4序列核苷酸相似性为99%;连接表达载体结果表明,原核表达载体pET-30a-f成功构建,为APMV-4诊断方法的建立提供了良好的技术基础。

摘要：对河北省新城疫分离株HeB0 2的生物学特性进行了鉴定 ,根据国外已发表的新城疫病毒f基因序列 ,设计了一对引物并以RT PCR特异性扩增出HeB0 2分离株的f基因 ,基因产物大小为 1 63kb ,与设计相符 ,对其进行序列测定后 ,与其它标准毒株f48E9、LaSota和Clone30的f基因进行同源性比较 ,结果表明 ,HeB0 2株与国内标准强毒株f48E9及目前广泛应用的弱毒疫苗LaSota和Clone30的f基因核苷酸序列的同源性分别为 88 1 %、84 9%和 83 8%,由此可以看出HeB0 2分离株与标准毒株和疫苗株在f基因上发生了变异。

摘要：【目的】对新城疫病毒（NDV）分离毒株进行分子特征分析,了解免疫鸡群发生新城疫的原因。【方法】用非免疫鸡胚从病鸡肺脏中分离新城疫病毒;参考GenBank上发表的NDV的f基因序列设计引物,应用RT-PCR方法对新城疫病毒分离株进行扩增,并构建克隆载体,对阳性质粒测序后进行f基因核苷酸及推导氨基酸序列分析。【结果】从发病鸡群中分离到6株NDV,分离毒株间的f基因核苷酸和f蛋白氨基酸同源性分别在99.6%-99.9%和99.1%-99.8%;分离毒株与参考毒株的f基因核苷酸和f蛋白氨基酸序列同源性分别在83.2%-87.3%和90.2%-93.8%;分离毒株f蛋白裂解位点的氨基酸顺序为^112R-R-Q-K-R-f^117,符合强毒株的分子特征;6个分离株均属NDV基因Ⅶ型。【结论】NDV分离株的f基因已经发生明显变异,与La Sota、Clone-30、V4等常用疫苗株在遗传进化上的亲缘关系较远,这可能是免疫鸡群发生新城疫的重要原因之一。

摘要：根据国外已发表的新城疫病毒 f基因序列 ,设计了 1对引物 ,并以 RT- PCR特异性扩增出新城疫病毒 He B0 2分离株的 f基因 ,基因产物大小为 1.6 3kb,与设计相符。对其进行序列测定后 ,与其他标准毒株 f4 8E9、L a Sota和Clone30的 f基因进行了同源性比较 ,结果表明 ,He B0 2株与国内标准强毒株 f4 8E9及目前广泛应用的弱毒疫苗株L a Sota和 Clone30的 f基因核苷酸序列的同源性分别为 88.1%、84 .9%和 83.8%。由此可以看出 ,He B0 2分离株与标准毒株和疫苗株相比 ,在

摘要：根据GenBank中新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的f基因序列设计了1对特异性引物,成功地对其中一株野鸭源NDV的f基因进行了克隆、测序,并推导其氨基酸序列,选择f基因部分片段绘制了遗传进化树。f基因全长1 662 bp,单一的阅读框架编码553个氨基酸,构成的f蛋白上有13个Cys残基位点和6个潜在的糖基化位点,其裂解位点的氨基酸序列为112R-R-Q-K-116R-117f。遗传进化分析表明,该NDV分离株为基因Ⅶ型NDV,与近年来我国家禽中所报道的NDV的基因型相一致。

摘要：为真核表达仙台病毒(SeV)融合蛋白(f)基因,本研究根据GenBank登录的SeV f基因序列设计合成一对特异性引物,以pMD18-T-f阳性重组质粒为模板扩增f基因,并将其克隆至杆状病毒穿梭质粒pfastBac HTa中,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,转化感受态细胞DH10Bac,提取重组杆粒rBacmid-f,经PCR鉴定正确将rBacmid-f转染Sf9细胞,连续传代后,细胞病变明显。经SDS-PAGE分析,成功表达了相对分子量为65ku左右的f蛋白,western blot和ELISA分析表明重组f蛋白具有良好的抗原性。

摘要：参照GenBank公布的鹅源新城疫病毒NA-1株f基因(DQ659677)的核苷酸序列设计1对引物,通过PCR扩增f基因全长,将其克隆到pET-22b(+)载体中,构建了原核表达载体pET-22b(+)-f,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达并纯化了重组蛋白,Western-blot证明该重组蛋白具有免疫原性。利用重组蛋白为包被抗原,通过方阵试验确定了包被抗原的最佳包被量为0.21μg/孔,建立了检测鹅源新城疫病毒抗体的间接ELISA诊断方法。

摘要：根据GenBank中登录的犬瘟热病毒f基因序列设计了1对引物,以从水貂犬瘟热病毒中提取的RNA为模板,扩增出一约1 000 bp的f基因片段。将PCR产物按相应的阅读框架克隆到原核表达载体pET-32a中,并将重组质粒转化***21(DE3),用1.0 mmol/L IPTG在30℃下诱导表达。结果显示,f基因的表达量约占细菌总蛋白的35%。SDS-PAGE电泳显示,表达产物的分子质量约为55 ku,与预计大小相符;经Western-blotting试验进一步证实,该基因获得了正确表达。