摘要：为研究NDV-f蛋白抗原表位在动物免疫应答中的作用特点,作者克隆和表达了NDV-f蛋白基因的部分片段,并检测其免疫反应性。首先根据f基因和载体pGEX-4T-1的多克隆位点自行设计了1对引物,以已克隆的NDV(f48E9株)的f基因为模板,通过PCR扩增获得长度为594 bp的片段。接着在电泳和酶切鉴定后将其定向插入pGEX-4T-1,构建重组质粒pGEX-4T-1-f594,并经PCR、双酶切及测序鉴定后,进一步将其转化到大肠杆菌BL21中。最后用IPTG诱导表达,提取物用SDS-PAGE和W estern-b lotting分析。结果表明,该基因片段表达的融合蛋白大小约为46 000,以包涵体形式存在,并具有良好的免疫反应性。

摘要：本实验选择最近分离的1株鸭源新城疫病毒,采用已经发表的鸡新城疫病毒序列设计引物,应用RT-PCR技术扩增鸭源新城疫病毒的f基因,并将其克隆至载体上,然后进行了核苷酸序列、氨基酸序列测定,结果表明该分离株为新城疫强毒株。

摘要：根据已发表的新城疫病毒基因组序列,设计并合成了扩增f基因和HN基因的2对引物,利用RT-PCR扩增了3个广西分离株的f基因和HN基因片段,并将其分别克隆到pMDl8-T载体中。结果表明：上述分离株f基因序列全长为1 662bp,编码553个氨基酸;HN基因序列全长为1 716bp或1 734bp,编码571或577个氨基酸。与国外发表的部分新城疫病毒强毒株和弱毒株之间相同序列进行比较,f基因核苷酸序列的同源性在83.8%~99.9%之间,氨基酸序列的同源性在88.4%~99.3%之间;HN基因核苷酸序列的同源性在80.9%~98.8%之间,氨基酸序列的同源性在86.9%~98.6%之间。系统进化树分析表明,GX21株NDV为基因Ⅰ型,GX215株NDV为基因Ⅱ型,GX117株NDV为基因Ⅶ型。

摘要：将鹅副粘病毒QY分离株蚀斑纯化后,根据已发表的鹅副粘病毒Sf02株全基因序列,分别设计合成3对引物,设计合成f基因引物,经RT-PCR方法扩增,克隆入PMD18-T载体,鉴定、测序。测序后拼接得出f基因的全序列长度为1 662 kb,编码553个氨基酸残基,与GenBank下载的几株参考毒株比较f基因编码区的核苷酸序列,发现所测QY株f基因核苷酸序列同源性与参考毒株Sf02为98.3%,与LaSota分别为82.4%,同源性分析表明分离株QY与国内的强毒株参考毒株的同源性较高。

摘要：根据麻鸡副黏病毒ZH-1株f基因序列,采用PCR体外定点突变技术,设计2对引物(引物中含有突变位点)。应用重叠PCR延伸法,分3次PCR扩增f基因,从而得到突变后的f基因,命名为f变基因,将其克隆进入pGEM-T载体,并进行PCR、酶切测序鉴定,使突变后的f变基因编码的氨基酸裂解位点为112 Gly-Arg-Gln-Gly-Arg-Leu117,具有弱毒株的特点。

摘要：应用RT PCR技术对分离自发病鸡群的新城疫病毒(NDV)的f基因进行了扩增,结果得到0.8kb的扩增产物。将该扩增产物克隆至pMD18 T载体中,经酶切和PCR鉴定后,证明与设计的目的片段完全相符,从而用分子生物学的方法确定了常规实验室诊断的正确性。

摘要：为了研究铜绿假单胞菌外膜蛋白f和I的重要表位,根据已公布的f和I基因序列设计2对特异性引物,以分离的水貂源铜绿假单胞菌ZHDL9基因组为模板,扩增重要的表位基因f_(190—342)(f1)和I_(21—83)(I2),并对得到的2段基因序列进行生物信息学分析。结果表明,PCR扩增所得f1和I2两段基因序列高度保守,不存在核苷酸的插入和缺失;通过融合PCR技术将得到的f1基因和I2基因无缝连接,得到651 bp的融合基因f1I2。将融合基因f1I2克隆至原核表达载体p ET-28a,成功构建了融合表达质粒p ET-28a-f1I2;将pET-28a-f1I2转化大肠杆菌BL21 (DE3),成功构建重组菌株BL21(pET-28a-f1I2),并对重组菌株进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测表明,成功表达了融合蛋白f1I2,且融合蛋白能够被His镍柱纯化; Western Blotting检测表明,表达的融合蛋白f1I2与铜绿假单胞菌ZHDL9菌株感染的水貂血清具有较好的反应原性。

摘要：研究旨在从分子生物学角度研究新城疫病原f基因,探究NDVf基因的遗传变异情况及其蛋白结构。提取新城疫病毒基因组RNA,根据GenBank中已知的NDVLa Sota株序列设计引物扩增f基因,将其克隆到pMD18-T载体后进行鉴定,对鉴定正确的重组质粒pMD-NDV-f进行测序分析。应用生物信息学软件对新城疫病毒f基因进行系统进化树分析、氨基酸序列同源性分析、蛋白结构跨膜区分析及f蛋白三级结构的预测。核苷酸序列测定结果表明:f基因为1792 bp,共编码553个氨基酸;生物信息学分析结果表明:f基因在种属间具有较高的保守性,试验获得的f基因与NDV La Sota、Clone30、V4、B1等弱毒株的一致性较高,具有典型的弱毒株特性,f基因的氨基酸序列与新城疫病毒La Sota株f基因的序列同源性最高可达100%;f蛋白的三级结构预测结果显示:f蛋白部分片段与新城疫病毒f蛋白融合片段的相似性为96%。研究为新城疫病毒的分子病毒学研究奠定了基础。

摘要：根据GenBank中登录的新城疫病毒(NDV)f基因序列设计了一对引物,用RT-PCR方法扩增了8个NDV贵州分离株的f基因片段,并将其分别克隆到pMD-18T载体中。序列分析结果表明,上述分离株f基因长度为1662bp,编码553个氨基酸,核苷酸和氨基酸序列同源性分别为84.0%～99.7%和87.5%～99.3%,但与LaSota、B1及f48E9等常见毒株的氨基酸同源性为87.2%～97.7%。f蛋白裂解位点的氨基酸序列分别为112R-R-Q-R/K-R-f117(其中P1、H2、N98、DQ、fW、BY、GZ7株为强毒)和112G-R-Q-G-R-L117(TN1株为弱毒)。利用MegAlign软件绘制NDV的系统发育进化树,结果表明,4个分离株(P1、H2、、N98、DQ)为基因Ⅶ型,2株(GZ、TN)为基因Ⅱ型,2株(fW、BY)为基因Ⅸ型。

摘要：【背景】鸽新城疫是由鸽Ⅰ型副黏病毒(pigeon paramyxovirus typeⅠ,PPMV-1)感染引起的危害最严重的疫病之一,至今尚无有效的防控制剂。【目的】分析鸽新城疫病毒BJ-C株的基因组信息及系统发育关系,为鸽新城疫的防控提供科学依据。【方法】设计首尾重叠的6对特异性引物,利用分段扩增的方法,以鸽新城疫病毒BJ-C株基因组cDNA为模板,分别扩增、测序后进行全基因组序列拼接。以NCBI数据库中发布的新城疫病毒序列为参考,针对鸽新城疫病毒BJ-C株的基因组、f基因建立系统发育树。【结果】鸽新城疫病毒BJ-C株的基因组全长为15192 nt。基于全基因组的系统发育分析发现其与PPMV-1/BJ-01/CH株的系统发育关系最近,核苷酸相似性为99.96%,氨基酸相似性高达100%,属于同一个分支,而与LaSota疫苗株等其他新城疫毒株的亲缘关系相对较远。基于f基因序列的系统发育树分析发现BJ-C株f基因与我国的BJP2013株同属一个分支。ClassⅡ类Ⅵ亚型f基因高变区序列(47-420nt)比对结果显示,安徽株Pigeon/Anhui/2369/2012、广东株Pigeon/Guangdong/GZ288/2013、北京株BJP13、浙江株Pigeon/Zhejiang/2036/2012及比利时株PPMV-1/Belgium/11-09620/2011等与BJ-C毒株处于同一个分支,同属Ⅵb亚型。【结论】本研究获得了鸽新城疫病毒BJ-C株全基因组序列,分析了其系统发育关系,确定其属于ClassⅡ类Ⅵb型,为后续防控产品的开发提供了理论依据。