摘要：用RT-PCR方法扩增口蹄疫病毒VP1基因,并克隆到pgem-t easy 载体中,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确,再亚克隆到真核表达载体pcDNA-3.1(+)上,得到重组质粒pcDNA-VP1.根据获得的口蹄疫病毒VP1基因的序列,结合相关的文献资料,设计合成免疫串联片段f,f含有VP1基因的主要抗原位点141位～160位及200位～213位的氨基酸序列,将f片段克隆到真核表达载体pcDNA-3.1(+)中,得到重组质粒pcDNA-f.在脂质体介导下,重组质粒pcDNA-VP1和pcDNA-f转染Vero细胞.间接免疫荧光分析表明VP1基因和f基因均在Vero细胞中成功进行了瞬时表达,为进一步研制fMD基因疫苗奠定了基础.

摘要：根据GenBank中新城疫病毒(NDV)f、HN基因序列和真核细胞表达载体pEGPf-N1的克隆位点,分别设计一对引物,通过PCR方法获得了f、HN基因,经回收纯化,将产物连接到克隆载体pMD18-T上。酶切鉴定和序列分析后,再将目的基因亚克隆到真核细胞表达载体pEGPf-N1上,经鉴定,成功构建含有NDVf和HN基因的真核细胞表达载体pEGPf-N1-f和pEGPf-N1-HN,为下一步研究NDVf和HN蛋白在细胞凋亡中的生物学功能奠定基础。

摘要：以鸡胚尿囊液繁殖的新城疫病毒 (昌黎株 ) ,经差速离心浓缩后 ,提取 RNA,参考国外发表新城疫病毒 f基因序列 ,设计并合成了一对长度皆为 2 6 bp特异性引物。经 RT- PCR扩增出 NDV昌黎株部分 f基因序列 ,将其插入本室构建的 fp KS(- ) ,进行序列测定。序列分析表明该部分 f基因长度为810 bp,编码 2 6 7个氨基酸 ,有 4个半胱氨酸残基和 2个糖基化位点 ,裂解位点区 (112 - 117)氨基酸序列为 R- R- Q- K- R- f,与所有强毒株在这一区域的序列 (R/ K- R- Q- R/ K- R- f)相符 ,证明

摘要：根据测得的鹅源副粘病毒(GPMV)NA-1株f基因序列,设计1对特异性引物,用作者构建的含f基因的质粒pGf为模板,PCR扩增f基因片段(去除终止密码子),与转座载体pfastBac连接,构建重组质粒pfastBac-f,并进行测序鉴定;根据测得的鹅细小病毒(GPV)GD-01株VP3基因序列,设计1对特异性引物,用作者构建的重组质粒pGVP3为模板,PCR扩增出有Linker的VP3基因(命名为LVP3)。再将重组质粒pfastBac-f与LVP3片段连接,构建重组转座载体pff-LVP3,转化到DH10Bac宿主菌,将目的基因定向插入到Bacmid质粒中,经筛选获得重组Bacmid f-L-VP3转染Sf9昆虫细胞,所表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测,特异蛋白分子质量约123 000。将表达蛋白免疫雏鹅,经抗体测定证明,表达的f-VP3重组蛋白能诱导机体产生特异性免疫应答。

摘要：从表现疑似副黏病毒症状的1日龄雏鸭和死亡鸭胚中分离到1株病毒,经HA、HI和病毒中和反应鉴定为副黏病毒,命名为SDfCH株。按常规方法测得SDfCH株的生物学毒力指标MDT、ICPI和IVPI分别为56.6 h、1.78和2.59,鸭胚半数致死量LD50为10^-8.5,表明SDfCH株为副黏病毒强毒株。用分离病毒对11日龄鸭胚和7日龄雏鸭攻毒,孵化出的雏鸭和攻毒的雏鸭均出现明显的剖检变化。根据GenBank中NDV f基因序列设计合成了3对引物,通过RT-PCR扩增出了鸭源Ⅰ型禽副黏病毒（APMV-1）SDfCH株的f基因。与已发表副黏病毒f基因相关序列对比结果表明：SDfCH株与鸭、鹅源副黏病毒的同源性较高,核苷酸和氨基酸的同源性均在96.4%-98.0%之间,而与Lasota株同源性较低,核苷酸和氨基酸同源性仅为84.4%和87.9%。表明该毒株相对于传统的Lasota株已经发生了较大的变异。

摘要：根据犬瘟热病毒(CDV)O nderstepoort株的核苷酸序列,设计合成引物,通过RT-PCR,从CDV O nderstepoort株RNA中扩增出2 197 bp的CDV全长融合蛋白(f)基因。将其与pGEM-T easy载体连接,通过软件分析其序列中的疏水区后,以pGEM-T/f为模板,PCR扩增出约254 bp和1 017 bp的f蛋白疏水区外编码序列。以2个扩增产物为模板,以OE-PCR(overlap ex tens ion-PCR)扩增出约1 271 bp的缺失疏水区的f基因(df),测序结果表明,df的序列除在疏水区以4个甘氨酸序列替代外,其余部分与f基因的同源性为99.2%。这表明,OE-PCR扩增法已成功地使CDV f基因疏水区缺失。

摘要：参考GenBank中的新城疫病毒（NDV）的基因序列，在f基因的3’端相对保守区设计1对引物，利用RT-PCR方法对华南农业大学兽医学院禽病学教研室近几年来分离并保存的24株新城疫病毒毒株的f基因进行了扩增，其扩增长度为450bp．测序结果表明：近十几年来，我国流行的新城疫毒株主要为基因Ⅶ型，其氨基酸序列均符合f蛋白裂解位点区（112～117）强毒株的氨基酸序列特征，并从分子水平上进一步证明我国最近流行的NDV主要为基因Ⅶ型NDV强毒株．

摘要：2004—2006年,从黑龙江省和内蒙等地发病饲养狐、貉中分离获得6株犬瘟热病毒(CDV),分别命名为MS01、SC01、ZD01、GN01、HL01、NM01分离株。根据Genbank上发表的的CDV f基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR方法分别对6个分离株f基因进行克隆、测序,并推导其氨基酸序列,绘制出f基因的遗传进化树。结果表明:6个CDV分离株f基因的开放阅读框架(ORf)均为1 989 bp,编码663个氨基酸,蛋白结构中的13个Cys残基位点和4个潜在的糖基化位点均高度保守,其裂解位点的氨基酸序列为220R-R-Q-R-224R。遗传进化分析表明:6个分离株与CDV代表强毒株A75/17属于同一谱系,均为强毒株。其中,HL01株与海豹瘟热病毒2型(PDV-2)亲缘关系较近,与其它5个分离株关系相对较远。

摘要：通过比对新城疫病毒强、弱毒株f基因序列,根据其在f0裂解位点的差异以及f基因保守序列设计合成NDV-V-probe和NDV-L-probe探针组和NDV-f、NDV-R引物组,以基因Ⅶ型NA-1株和基因Ⅱ型LaSota疫苗株病毒RNA作为定量检测的标准品,建立检测方法。对所建立的标准曲线进行分析,相关系数R2均为0.997,线性关系良好。通过计算变异系数CV/%分别为0.034%和0.027%,均小于1%,说明稳定性良好。对禽类常见病毒IBV、H9亚型AIV检测未发现有交叉反应,特异性好、重复性佳。结果表明:成功建立了新城疫病毒强、弱毒双重荧光定量RT-PCR的检测方法,实现了从分子水平上快速鉴别强、弱毒力的新城疫病毒,也可快速区分野毒感染动物和疫苗接种动物,减少不必要的经济损失。

摘要：为研究当前流行的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基因型、致病性及其与传统新城疫病毒疫苗株(La Sota等)的核苷酸差异,试验从某发病鸡场病死鸡体内分离到1株疑似NDV毒株,经红细胞凝集试验(HA)和红细胞凝集抑制试验(HI)初步确定为鸡源NDV。参照GenBank公布的NDV f基因部分片段(登录号:Jf950510.1)设计1对引物,通过RT-PCR技术扩增分离株的f基因并克隆、测序,测序结果与NCBI中NDVf基因序列进行比对,构建系统进化树并分析其基因型;通过测定鸡胚平均致死时间(MDT)、1日龄鸡脑内致病指数(ICPI)和6周龄鸡静脉致病指数(IVPI)判断病毒致病性;参照GenBank公布的NDV全基因组序列(登录号:Jf950510.1)设计9对引物对分离株进行全基因组序列测定,并分析其基因组结构。结果表明,RT-PCR扩增得到f基因长约500bp,基于f基因构建的系统进化树显示分离株为基因Ⅶ型NDV;MDT、ICPI和IVPI分别为52.8h、1.675和2.46,表明分离株属于强毒株。全基因组序列分析显示,分离株全基因组全长15 192bp,与传统La Sota株基因组相比,序列多出6个碱基,核苷酸序列同源性82.8%。本研究成功分离到1株基因Ⅶ型NDV强毒株,且与传统疫苗毒株La Sota的核苷酸序列同源性差异较大。