摘要：设计2对引物分别用于新城疫强、弱毒的检测。使用强毒引物f1、R1可从NDV强毒株中特异性扩增出349bp的目的片段,使用弱毒引物f2、R2可从NDV弱毒株中特异性扩增出255bp目的片段,该方法对H9亚型禽流感病毒(AIV)、传染性支气管炎病毒(IBV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)的检测结果均为阴性。灵敏性试验结果显示,该方法对NDV强、弱毒株的最小检出量分别为1pg和10pg。利用该方法对7份临床样品进行检测,结果与测序结果一致,说明该方法可用于新城疫强、弱毒的快速鉴别诊断。

摘要：通过对大量不同毒力NDVf基因核苷酸序列的分析,根据强弱毒株f0裂解位点的序列差异设计合成了三对引物,建立了快速诊断新城疫并能鉴别其强弱毒株的反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,整个试验过程可在5h内完成。试验表明,该方法具有快速特异和操作简便的特点,不仅适用于对鸡胚毒的检测,而且适用于对病鸡组织匀浆液的检测,是新城疫鉴别诊断和流行病学调查的颇具潜力的分子诊断方法。

摘要：为了建立一种适用于临床快速诊断的小反刍兽疫病毒(PPRV)RT-nPCR检测方法,试验依据GenBank公开的PPRV基因序列,针对f基因设计了2对引物,经过反应成分与条件的优化等方法对检测小反刍兽疫病毒的RT-nPCR方法进行了研究。结果表明:该方法检测的极限为4.362×10^-5 ng·μL^-1,羊口疮病毒、山羊痘病毒、口蹄疫病毒和蓝舌病病毒检测为阴性,临床28份样品检测结果有4份样品为阳性,阳性率14.3%。说明成功建立了一种高度特异、灵敏的检测PPRV的RT-nPCR方法。

摘要：以灭活的检测用抗原为材料,抽提灭活小反刍兽疫病毒的基因组RNA作为模板,根据参考文献及GenBank下载的序列,设计3对位于f基因的引物(2对为套式引物),进行RT-PCR扩增及扩增片段的T载体克隆、序列分析。结果显示,所设计引物单独或套式RT-PCR对模板均有预期大小的片段扩增;扩增片段经核苷酸序列测定和分析,表明所扩增片段为小反刍兽疫病毒的f基因片段。且所设计引物对同属牛瘟病毒、犬瘟热病毒无扩增,证明所用引物为小反刍兽疫病毒特异性引物,此3对引物可用于小反刍兽疫与牛瘟等同属病毒的鉴别诊断。

摘要：根据新城疫病毒已报道的基因序列设计了一对引物,扩增f基因3'端374 bp片段,包括f基因信号肽序列和裂解位点。经过RT-PCR、PCR产物测序和序列分析,表明该毒株为基因VII型强毒株,和中国动物卫生与流行病学中心2009年分离到的毒株NDV09-038相似性最高,可达98%。基因进化树分析表明该毒株与常用疫苗株亲源关系较远,与I系疫苗株Mukt eswar相似性为81.4%,与Hert s'33的相似性为84.5%。氨基酸序列分析表明该毒株为典型的强毒株。

摘要：目的应用wha f基因测序方法,对20型肺炎链球菌进行血清型鉴定。方法采用血清凝集法和用20型肺炎链球菌型特异性基因(wci L基因)合成的引物进行PCR扩增,对中国医学细菌保藏管理中心所保藏的20型肺炎链球菌进行血清学鉴定;根据Gen Bank上发表的wha f基因设计合成引物,PCR扩增wha f基因,利用测序获得基因序列,分析wha f基因多态性。结果 7株20型肺炎链球菌菌株均能与20型血清产生血清凝集反应,wci L基因PCR扩增产物,可见与预期相符大小500 bp的特异性条带。wha f基因PCR扩增产物,除20-3外,其余6株菌均可见1 000bp大小与预期相符的PCR扩增产物。wha f基因测序和分析显示:20-2、20-4、20-5、20-7与20B亚型(Gen Bank accession No.:CR931679和JQ653093)的wha f基因序列相同;20-6与20A亚型(Gen Bank accession No.:JQ653094)的wha f基因序列相同;20-1与CR931679和JQ653093相比,在898有点突变(A→C)。20-3的wha f基因比20A亚型和20B亚型的wha f基因均少了约600 bp。结论 20-6为20A亚型肺炎链球菌,20-2、20-4、20-5、20-7均为20B亚型肺炎链球菌。

摘要：为鉴定并分离出疑似鸽副黏病毒病的病原,临床采集广东省清远市某鸽厂疑似鸽新城疫的发病鸽脑、肝、脾、肺组织,处理后接种到10日龄SPf鸡胚尿囊腔,收集尿囊液,测定血凝价、细胞半数感染量(TCID_(50))。设计f、HN基因引物,扩增分离株f、HN基因,使用Lasergene软件对f基因序列分析。结果显示,此分离株f蛋白裂解位点处的氨基酸排列符合强毒株裂解位点特征,与Qinghai/1344/2017、China/SDLC/2011、Sichuan/2045/2014株同源性分别为99.2%、98.8%、98.5%,属于基因Ⅵ型。传到6代后,分离株血凝价稳定在7~8log2。1~4代TCID_(50)分别为:10^(-6)/0.1ml、10^(-6.5)/0.1ml、10^(-7.5)/0.1ml、10^(-7.8)/0.1ml,5^(-10)代TCID_(50)分别为:10^(-8.4)/0.1ml、10^(-8.2)/0.1ml、10^(-8.59)/0.1ml、10^(-8.23)/0.1ml、10^(-8.49)/0.1ml、10^(-8.4)/0.1ml,表明分离的毒株TCID_(50)较高且5代以后的TCID_(50)分布在10^(-8.2)∽10^(-8.59)/0.1ml。本研究旨在为今后鸽新城疫分子流行病学及鸡胚成纤维细胞测定病毒感染量方面研究提供理论依据。

摘要：本研究针对犬瘟热病毒特异保守的f基因设计一对引物,建立了犬瘟热病毒进行快速检测的RT-PCR方法。通过特异性、敏感性试验以及PCR产物的序列分析试验,证实本研究建立的RT-PCR检测方法具有敏感性高、特异性好的特点。使用该方法从宠物门诊送检的52例疑似病料中共检出阳性样本34份,阳性率为65.38%,说明该方法可用于为CDV临床快速诊断及流行病学调查。

摘要：本试验根据已发表的新城疫病毒(NDV)的f基因序列设计特异性引物,对山东地区两株NDV流行株的f基因进行了克隆与序列分析,分别扩增到了A株和B株f蛋白编码区全基因,ORf全长均为1662bp。应用分子生物学软件对A株和B株的核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了分析。两毒株核苷酸序列同源率为87%,都编码553个氨基酸,氨基酸同源率为91%。与部分已发表的毒株相比:A株与～株同源率最高,为98%,B株与JS鹅株同源率最高,为98%。抗原位点、糖基化位点的数量和位置高度保守,半胱氨酸残基数量不同,A株13个,B株12个。分离株都具有3个强疏水区。A株、B株裂解区氨基酸序列符合强毒株特点,二者均为强毒株。从基因分型情况看,A株属于基因Ⅸ,B株属于基因Ⅶ。A株与f48E9株遗传距离最近,B株与JS鹅株遗传距离最近。

摘要：参考GenBank中Ⅰ型禽副粘病毒（Avian paramyxovirus,APMV-1）序列,在f基因的3’端相对保守区设计1对引物,利用RT-PCR方法对华南农业大学兽医学院禽病学教研室近两年来从广州和深圳两个地区分离的4种动物来源共10株Ⅰ型禽副粘病毒毒株的f基因进行扩增,其扩增长度约为450bp。测序结果表明：广州株与NDV的基因Ⅵ型有高度的同源性,1个深圳株与Ⅶ型有较高的同源性,其氨基酸序列均符合f蛋白裂解位点区（112-117）强毒株的氨基酸序列特征;其他4个深圳株均与基因Ⅰ型有很高的同源性,其氨基酸序列均符合f蛋白裂解位点区（112-117）弱毒株的氨基酸序列特征。