摘要：旨在揭示培育品种—苏太猪(杜洛克×梅山猪)f18大肠杆菌抗性的调控通路和重要候选基因,同时进一步探究中外猪品种f18大肠杆菌抗性调控遗传基础的差异。本研究以课题组前期获得的苏太猪和梅山猪f18大肠杆菌抗性型与敏感型断奶仔猪全同胞个体为研究对象,通过转录组测序筛选苏太猪f18大肠杆菌抗性相关的调控通路以及重要候选基因,并在细胞水平,利用qPCR和Western blot分析f18大肠杆菌刺激小肠上皮细胞IPEC-J2后重要候选基因(蛋白)的表达变化,同时利用qPCR检测重要候选基因在苏太和梅山断奶仔猪f18大肠杆菌抗性型与敏感型个体十二指肠组织中的差异表达情况。结果显示:1)在苏太断奶仔猪f18大肠杆菌抗性型与敏感型个体中筛选出238个差异表达基因,主要参与Toll样受体信号通路(toll-like receptor signaling pathway)和糖脂类通路(glycosphingolipid biosynthesis-lacto and neolacto series),其中TLR5、IL-1β、fUT2为重要候选基因;2)不同血清型f18大肠杆菌(f18ac、f18ab)菌体分别刺激小肠上皮细胞IPEC-J2后,fUT2、IL-1β、TLR5基因mRNA表达水平显著上调(P0.05)。结合课题组前期关于梅山猪及外来引进品种f18大肠杆菌抗性相关分子机制研究及报道,本研究进一步证明中外猪品种f18大肠杆菌抗性调控的遗传基础确实存在差异,Toll样受体信号通路及CD14、TLR5等基因可能在中国地方品种—梅山猪抵抗f18大肠杆菌感染过程中发挥着免疫调控作用,而鞘糖脂合成通路及fUT2等基因可能在外来猪品种f18大肠杆菌受体形成过程中起关键作用。

摘要：本研究旨在检测TLR4基因mRNA在猪各个组织的分布以及在f18大肠杆菌抗性型和敏感型群体间差异表达水平,为探讨该基因在免疫识别和f18大肠杆菌抗性中发挥的作用提供理论依据。本试验运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术进行定量测定。首先,各取8头35日龄f18大肠杆菌抗性型和敏感型苏太仔猪组织样,包括心脏、肝脏、脾脏等11个组织,提取总RNA,以GAPDH基因为内参基因,进行实时荧光定量PCR。对TLR4基因mR-NA进行均一化处理,利用荧光阈值(Ct值)计算TLR4基因mRNA在各个组织以及f18大肠杆菌抗性型和敏感型群体间表达量。结果显示,TLR4 mRNA在猪各种组织中广泛表达,在肺、淋巴结、肾脏和脾脏等免疫器官中表达量较高,f18大肠杆菌敏感型的TLR4基因表达量普遍高于抗性型个体的表达量,在各个组织中(除胃外)TLR4表达量差异倍数从1.083到2.980不等;在肺、淋巴结、肾脏和胸腺组织中,f18大肠杆菌敏感型的TLR4基因表达量显著高于抗性型个体的表达量(P<0.05)。本研究结果表明,TLR4基因通过天然免疫识别机制对猪f18大肠杆菌病等革兰氏阴性疾病有一定的影响,TLR4基因表达量的下调与f18大肠杆菌的抗性具有一定程度的关系。

摘要：运用荧光定量PCR方法分析SLA-DQA基因在苏太猪f18大肠杆菌病抗性和敏感性资源群体中各个组织的分布和表达水平,以及在抗性组和敏感组中的表达差异,以探讨SLA-DQA基因在断奶仔猪抗大肠杆菌f18菌株感染中发挥的作用。试验结果显示,SLA-DQA基因在所检测的11个组织中均有表达,并呈现相似的表达规律,在肺、脾和淋巴结中的表达量较高,在空肠、十二指肠和胸腺中也有中度的表达。SLA-DQA基因在抗性组个体各个组织中的表达量普遍高于敏感性个体,而且在肺、脾、淋巴结、空肠和十二指肠5个组织中,SLA-DQA基因在抗性组个体中的表达量显著高于敏感性个体(P<0.05)。由此可见,当断奶仔猪受到大肠杆菌毒素侵扰后,SLA-DQA基因较高的表达量有利于SLA-II类抗原分子的合成,SLA-DQA基因虽然不是针对由大肠杆菌f18菌株造成的断奶仔猪腹泻和水肿病的直接免疫因子,但是在断奶仔猪受大肠杆菌f18菌株病原菌侵袭后引起的一系列生理变化和应答过程中发挥着重要的作用。

摘要：本研究旨在分析CD14基因在大白猪f18大肠杆菌耐受型和敏感型个体间的mRNA表达差异,以探讨CD14基因在断奶仔猪抗f18大肠杆菌中发挥的潜在作用。挑选大白猪耐受型和敏感型个体各4头,通过利用Real-time PCR方法比较分析CD14基因在个体各组织间的表达规律。结果表明:CD14基因在大白猪耐受型和敏感型个体各组织间的表达趋势有着高度的一致性,其中CD14基因在肝中呈现高水平表达,在肺、肾和淋巴结中呈现中度表达,而在其他组织中的表达水平都非常低,CD14基因在耐受型个体各组织间的表达水平几乎都高于敏感组,其中CD14基因表达量在空肠组织中差异达到极显著水平(P<0.01)。由此推测,CD14基因对*** f18抗性的调节可能不是通过直接作为f18大肠杆菌的受体来实现,而是通过参与并调节机体的免疫反应来实现的,并且CD14基因的上调可能与f18大肠杆菌的抗性存在一定的联系。

摘要：热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)是哺乳动物普遍存在的小休克蛋白家族成员之一,在参与调解细胞的增殖、分化和细胞凋亡过程中起到了重要的作用。为探讨猪HSP27基因的表达水平及其与f18大肠杆菌抗性的关系,本研究运用荧光定量PCR方法检测HSP27基因在苏太猪f18大肠杆菌病抗性型和敏感型资源群体中各组织的表达水平,并分析在*** f18抗性组和敏感组中的表达差异。结果表明:HSP27基因在所有检测个体的11个组织中均有表达,其中肺中表达量最高,其次在肝、脾、肾、十二指肠和空肠中表达较高,而在肌肉、胸腺和淋巴结中表达较低;抗性组和敏感组差异表达显示,在肝脏和淋巴结2个组织中,HSP27基因在抗性组个体中的表达量极显著高于敏感性个体的表达量(P<0.01),在脾脏、胸腺和空肠3个组织中,HSP27基因在抗性组个体中的表达量显著高于敏感性个体的表达量(P<0.05)。HSP27基因在*** f18抗性组免疫组织和肠道组织中的高水平表达提示HSP27基因可能在机体抵抗f18大肠杆菌感染过程中发挥了重要的免疫调控作用。

摘要：本研究旨在分析TAP1基因在断奶仔猪抗性型和敏感型个体间的表达差异,探讨TAP1基因在断奶仔猪抗f18大肠杆菌中发挥的潜在作用。挑选35日龄苏太猪f18大肠杆菌抗性型和敏感型仔猪各8头,运用实时荧光定量PCR技术对TAP1基因在11个组织中的表达水平进行测定。结果表明:TAP1基因在抗性型和敏感型个体中的组织表达谱呈现一致性,且在肠道组织(十二指肠、空肠)、免疫组织(脾、淋巴结、胸腺)和肺中表达量较高。在11个组织中,抗性型个体的TAP1基因表达量普遍高于敏感型个体,差异倍数从1.21到2.37不等,其中在脾、肺、淋巴结、胸腺和空肠、十二指肠中,抗性型个体的TAP1基因表达量显著高于敏感型个体(P<0.05)。因此,TAP1基因在免疫组织及肠道内的高表达可能对断奶仔猪抵御*** f18的感染具有重要作用。

摘要：本研究旨在通过对SLA-DQA基因在苏太猪大肠杆菌f18菌株抗性群体和大约克猪、梅山猪断奶仔猪各组织间的表达规律及其在3个群体间表达差异的分析,探讨SLA-DQA基因与国内外猪品种断奶仔猪不同水平免疫机能和大肠杆菌抗性间的潜在关系。研究结果显示,SLA-DQA基因在3个猪群体所检测的11个组织中均表达,并且表达规律基本一致,在肺脏、脾脏、淋巴结等免疫器官中的表达量较高,在胃、十二指肠、空肠等消化道中表达量居中。SLA-DQA基因在苏太猪所有检测组织中的表达量均最高,大约克中次之,梅山猪中表达量最低。尤其在肺脏、淋巴结和胸腺3个组织中,SLA-DQA基因在苏太猪中的表达量均显著高于其在梅山猪中的表达量;在胸腺组织中,SLA-DQA基因在苏太猪中的表达量显著高于大约克猪。研究结果表明,SA-DQA基因在断奶仔猪受大肠杆菌f18菌株病原菌侵袭后引起的一系列生理变化和应答过程中发挥着重要的抗原递呈和激发机体免疫的作用。

摘要：试验旨在探讨LTβR基因在仔猪出生至断奶期间的mRNA表达变化,为进一步研究该基因与f18大肠杆菌致病的相关性提供理论依据。本试验选取从初生到断奶的4个日龄(8、18、30和35日龄)苏太仔猪各4头,利用实时荧光定量PCR方法分别比较分析了LTβR基因在各个体11个组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、肌肉、胸腺、淋巴结、十二指肠及空肠)间的表达规律。结果表明,LTβR基因在肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、淋巴结、十二指肠及空肠组织中呈现较高水平的表达,并且表现出明显的发育性表达差异。LTβR基因在8日龄仔猪淋巴、十二指肠和空肠组织中的表达极显著高于其他日龄(P<0.01);在8日龄仔猪肺脏组织中的表达极显著高于35日龄(P<0.01),且显著高于30日龄(P<0.05);在35日龄仔猪肝脏组织中的表达极显著高于其他日龄(P<0.01);在35日龄仔猪胃组织中的表达显著高于18日龄(P<0.05)。由此推测,8日龄左右为仔猪肠道免疫屏障快速形成期,LTβR基因的较高表达可能有利于仔猪对f18大肠杆菌抗性。

摘要：研究表明,fUT1基因M229和M307位点皆为断奶仔猪抗f18大肠杆菌重要变异位点。本试验采用PCRSSCP和PCR-RfLP方法分别对171头杜洛克猪群体M229和M307位点多态性进行分析,结果表明:M229和M307位点均检测到3种基因型,其中M307位点AA、AG、GG基因型个体数分别为47、100、24头,基因型频率分别为0.275、0.585、0.140,等位基因A为优势基因;M229位点CC、CT、TT基因型个体数分别为90、74、7头;基因型频率分别为0.526、0.433、0.041,等位基因C为优势基因;两种基因型都呈现交叉分布,其中M307位点AA基因型个体中M229位点CC/CT基因型分布较多,TT基因型分布比例较低。通过Haploview软件分析M229和M307位点之间的连锁不平衡水平,结果发现fUT1基因M229和M307位点之间的r2值为0.46,呈现较低连锁不平衡水平。因此,今后在对杜洛克猪抗f18大肠杆菌育种工作中,可以尝试对fUT1基因M307和M229位点同时选育,以期为进一步确证这两个位点的遗传效应及利用其开展抗病育种选育提供一定的试验依据。

摘要：目前有研究表明fUT2基因是仔猪大肠杆菌f18受体形成的关键候选基因,探讨fUT2基因在仔猪出生至断奶期间的m RNA表达变化,可为进一步研究该基因对f18大肠杆菌致病的相关性提供一定的理论依据。本试验挑选4个日龄(8、18、30日龄和35日龄)苏太仔猪各4头,通过利用Real-time PCR方法分别比较分析了fUT2基因在各个体11个组织(心、肝、脾、肺、肾、胃、肌肉、胸腺、淋巴结、十二指肠、空肠)中的表达规律。结果表明:fUT2基因在不同日龄苏太猪11个组织中均有表达,其中在肺、肾、胃、胸腺、淋巴和十二指肠中呈现较高表达,在肝、脾、空肠中呈现中度表达,在心和肌肉中呈现低表达。fUT2基因在8日龄个体空肠组织上的表达水平显著的高于其他3个日龄(P0.05)。由此推测,8日龄左右fUT2基因的高表达可能有利于仔猪空肠组织中f18大肠杆菌受体的快速形成,需进一步对仔猪8日龄至18日龄间fUT2基因的表达变化做进一步细致的检测。