摘要：目的原核表达及纯化牛源产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)f41菌毛蛋白,并制备f41菌毛蛋白的多克隆抗体。方法以ETEC基因组为模板,采用PCR法扩增f41菌毛基因,克隆入表达载体pQE-30,转化大肠杆菌XL1-Blue,IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE分析,表达产物经切胶纯化,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,采用间接ELISA法测定抗血清效价,Western blot分析f41菌毛蛋白与多抗的反应原性。结果重组表达质粒pQE-30-f41经双酶切及测序证实构建正确;f41菌毛重组蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约为32 000;重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35%,纯化的重组蛋白纯度可达92%;制备的抗血清效价达1∶2.56×106以上,Western blot结果表明f41菌毛蛋白与制备的多抗具有良好的反应原性。结论已成功原核表达并纯化了f41菌毛重组蛋白,且制备了高效价的多克隆抗体,为单克隆抗体制备及其免疫检测方法的建立奠定了基础。

摘要：目的为了分析原核表达的ETECf41和K99菌毛亚单位的抗原性和作为基因工程亚单位疫苗的可能性。方法针对黏附素f41和K99的编码序列,设计两对特异性引物,扩增f41和K99菌毛蛋白的编码基因,经序列测定后,克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,转化***21(DE3),筛选到可以表达f41和K99菌毛亚单位的菌株。经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blot试验分析原核表达的f41和K99重组蛋白的抗原性。结果表达的f41和K99菌毛亚单位蛋白可以与抗f41和K99菌毛蛋白的单因子血清反应。结论原核表达的f41和K99重组蛋白具有良好的抗原性。