摘要：高等植物中的△12脂肪酸脱饱和酶是将油酸转化为亚油酸的酶。根据已发表的其他高等植物的fad2基因的保守序列设计同源引物,通过RT-PCR从玉米幼胚中扩增得到一个特异的cDNA基因片段。通过生物信息学分析,从玉米幼胚cDNA和基因组中均扩增得到1164bpfad2基因(GenBank登陆号:DQ496227),它编码387个氨基酸,含有完整的ORF框,在ORF框内无内含子。序列联配与树状分析结果表明,fad2推导的氨基酸序列与其他物种的?12脱饱和酶基因具有同源性。它含有3个组氨酸保守域和2段很长的疏水区,是一个跨膜4次的膜结合蛋白。半定量RT-PCR分析显示fad2基因在玉米幼胚中表达量最高,在叶、茎、根中亦有低水平表达。

摘要：【目的】探索中间锦鸡儿基因组中fad2基因的拷贝数,分析不同拷贝的表达模式,以期揭示不同拷贝在植物体内的功能分工。【方法】根据中间锦鸡儿(Caragana intermedia)fad2基因的保守序列设计1对引物SF和SR,利用该引物对PCR扩增制备114 bp的Southern检测探针,探针进行地高辛标记后,采用罗氏Southern杂交试剂盒进行Southern检测。根据中间锦鸡儿3个fad2基因各自的特异差异序列,分别设计定量PCR引物序列,以actin基因为内参,对中间锦鸡儿的根、茎、叶及不同发育时期(发芽15,25,35 d)种子的cDNA进行定量PCR分析。【结果】中间锦鸡儿fad2基因至少有4个拷贝,且不同拷贝的表达模式不同。fad2-2A基因在根和发育中期、后期的种子中低水平表达,在幼嫩的茎、叶以及发育早期的种子中高水平表达;fad2-1A基因在根中的表达量最低,在种子发育早期、中期大量表达,在幼嫩叶子中表达水平也较高;fad2-1B基因仅在种子发育中期大量表达,在其他组织及种子其他发育阶段的表达量均保持在本底水平。在不同组织以及种子的不同发育时期,fad2-1A相对表达量的变化幅度最大,达到了近100倍,fad2-1B次之,fad2-2A最小。【结论】结合序列比对分析推测:fad2-2A基因可能主要负责合成膜脂中的亚油酸,fad2-1A主要负责种子及叶子贮脂中亚油酸的合成,fad2-1B负责种子贮脂中油酸的去饱和作用。

摘要：首先利用PCR从甘蓝型油菜(Brassica napus L.)和Lesquerella fendleri基因组DNA中分别扩增出Δ12-脂肪酸去饱和酶fad2基因片段,再以扩增出的片段为模板设计引物从一端扩增出相应的小片段,然后将同一基因的大小片段反向连接,插入到种子特异表达载体2300-nap多克隆位点的napin启动子和nos终止子之间,构建成可以在种子中转录表达发夹RNA(Hairpin RNA,hpRNA)结构的植物表达载体.

摘要：根据已克隆的Zmfad2基因(GenBank登陆号:DQ496227)设计引物,通过RT-PCR扩增得到120 bp的特异性基因片段作为hpRNA干涉片段。利用pUCCRNA i与pUb ***为中间载体,成功构建了含Ub iqu itin启动子和hpRNA i片段的干涉表达载体p1 300+UFIFN。以自主选育的高油玉米自交系幼胚为材料,诱导、继代出胚性愈伤组织,利用携带p1 300+UFIFN质粒的根癌农杆菌LBA4404对其进行遗传转化。对抗性植株进行PCR检测,共获得6株转基因阳性株。

摘要：桉树是世界上重要的多功能树种,从桉叶中提取的桉叶油含有不饱和脂肪酸,对于桉叶油的药用活性和桉树的抗逆性具有重要的作用。为深入了解桉树的不饱和脂肪酸的生物合成途径和分子调控机理,本研究根据fad2基因的保守区段设计兼并引物,从赤桉嫩叶中获得了一条fad2基因的片段,并进一步利用RACE技术得到了此基因的全长cDNA,将其命名为EC-fad2基因。通过生物信息学分析发现,该基因全长cDNA为1 472 bp,编码389个氨基酸,并且具有fad2蛋白特有的保守序列和相关特征。经过比对分析,发现赤桉的fad2蛋白与其他植物的fad2蛋白具有较高的相似性。

摘要：针对根结线虫16D10基因和花生Δ12脂肪酸脱氢酶(fad2)基因的核酸序列设计了两条含有GUS内含子的RNA干扰结构序列。以pBS-T质粒为中间载体,将这段序列连接进植物转化载体pRI 101-AN中,获得针对两个基因的RNAi载体。经SalⅠ和KpnⅠ双酶切验证,目的序列已准确插入目标载体。此载体可用以培育抗根结线虫病和高油酸花生新品种。

摘要：油酸去饱和酶fad2(fatty acid desaturase 2)在油酸中引入第2个双键生成亚油酸,是植物体内产生多不饱和脂肪酸的第一步关键调控酶。本研究利用其它植物fad2基因的保守序列设计简并引物,采用RT-PCR(reverse transcriptase-polymerase chain reaction)技术和RACE(rapid amplification of c DNA ends)克隆技术,从樟树中克隆得到fad2基因并进行序列比对和分析。所得基因的c DNA序列全长1 624 bp,ORF 1 152 bp,编码384个氨基酸,预测分子量约为44 k D,等电点8.16,为非分泌型蛋白。以Neighbor-Joining法构建进化树,发现樟树fad2基因与樟科鳄梨属鳄梨中的同类基因亲缘关系最近。樟树fad2基因的成功克隆为进一步研究基因的功能和调控模式奠定基础。