摘要：目的:探讨黏着斑激酶(fak)表达水平对结直肠癌细胞增殖及运动的影响。方法:针对fak基因不同靶点设计siRNA序列,构建siRNA重组子,转染Caco-2细胞,以RT-PCR和免疫细胞化学方法检测fak mRNA和蛋白表达变化及时间效应,同时检测fak基因敲低对Caco-2细胞的凋亡、增殖及迁移的影响。结果:fak siRNA导入Caco-2细胞后,fak mRNA和蛋白表达水平明显下调,细胞增殖及迁移能力受抑,呈时间依赖关系,fak mRNA水平下调在转染后48h达到最大。结论:fak siRNA可有效抑制靶基因表达,fak表达水平下调后Caco-2细胞的增殖及运动明显受抑制。

摘要：Focal adhesion kinase(fak)is an intracellular tyrosine kinase that plays a critical role in the occurrence,development,and metastasis of cancer through both its kinase-dependent catalytic functions and kinase-independent scaffolding *** kinase inhibitors target only its catalytic activity,leaving the scaffolding functions ***,proteolysis targeting chimeras(PROTACs)offers a promising approach by degrading the entire fak protein,thereby inhibiting both functions *** this study,we designed and synthesized novel PROTAC degraders,utilizing a defactinib derivative(compound 12)as the fak ligand and a lenalidomide analog as the E3 ligase *** structures of these compounds were confirmed through^(1)H NMR,^(13)C NMR,and high-resolution mass spectrometry(HRMS).Among the synthesized compounds,the optimized compound 16b exhibited potent degradation activity against fak protein in A549 cells,with a DC_(50)of 6.16±1.13 n M,significantly inhibiting the proliferation and colony formation of these *** to defactinib,16b showed enhanced inhibition of A549 cell migration and ***,our research demonstrated that the rapid and effective fak degradation induced by 16b was mediated by a CRBN-dependent proteasome mechanism.

摘要：目的:研究RNA干扰(RNAi)抑制黏附斑激酶(fak)基因表达后对鼻咽癌HNE-1细胞株增殖和凋亡的影响.方法:利用免疫组化法检测鼻咽癌HNE-1细胞株中fak基因的表达.根据基因库上的fakmRNA序列,设计合成针对fak的小干扰RNA(siRNA)并转染HNE-1细胞,收集细胞总RNA和总蛋白,采用RT-PCR,WesternBlot等方法检测细胞中fak基因表达的变化;利用MTT法检测细胞的生长增殖;流式细胞术观察其对细胞周期及凋亡的影响.结果:鼻咽癌HNE-1细胞株中fak基因呈阳性表达.针对fak的siRNA使鼻咽癌HNE-1细胞株fakmRNA和蛋白表达水平分别下调71.4%,59.8%;MTT法检测显示,细胞的生长增殖受到明显抑制,抑制率可达36.8%;转染后48h,鼻咽癌HNE-1细胞G0/G1期细胞量增加,而S期及G2-M期的细胞减少,同时凋亡率增加.结论:干扰鼻咽癌HNE-1细胞内fak基因的表达,可抑制肿瘤细胞的生长增殖,使细胞周期重新分布并促进凋亡.

摘要：目的本研究利用RNA干扰技术,以粘附斑激酶(focal adhesion kinase,fak)为靶基因,设计构建重组体,并对重组体进行鉴定,为下一步探索心肌纤维化的新途径奠定基础。方法设计小发夹结构四条DNA序列,经退火成互补两对双链,再克隆到载体PAVU6+27中构建重组体,转化入JM109菌株,提取质粒进行酶切鉴定、测序分析。结果酶切鉴定和测序分析均提示fak靶向RNA干扰重组体的构建成功。结论fak靶向RNA干扰重组体的成功构建,为下一步利用该重组体沉默心脏成纤维细胞中fak基因的表达,探索心肌纤维化机制打下基础。

摘要：目的构建胰岛素样生长因子-1受体(IGF1R)RNA干扰真核表达载体,探讨人肝癌细胞株MHCC-97H在IGF1R基因抑制前后黏附和侵袭能力的变化及相关信号分子的变化。方法以pGCsi-U6-Neo-GFP为空白质粒载体,以IGF1R为靶基因,按GeneBank IGF1R基因核苷酸序列和Tusch1设计原则,选择5对2条互补的带发夹结构的核苷酸序列,连接到pGCsi-U6-Neo-GFP空载体中。转化大肠杆菌Stable3,扩增后提取质粒,进行酶切鉴定和测序分析。转染模型细胞(293T),进行RT-PCR及Westernblotting检测,筛选出沉默效果最好的质粒载体。用脂质体转染MHCC-97H肝癌细胞,G418筛选并建立IGF1R基因沉默的MHCC-97H肝癌细胞株。检测MHCC-97H细胞株黏附和侵袭能力及fak蛋白的表达变化。结果构建的IGF1R pGCsi-U6-Neo-GFP shRNA,经酶切和DNA测序证实与设计完全一致;RT-PCR及Western blotting检测发现IGF1R沉默效率达88%。MHCC-97H细胞IGF1R被沉默后黏附和侵袭能力下降,fak蛋白表达下降。结论IGF1R pGCsi-U6-Neo-GFP shRNA能够降低MHCC-97H细胞黏附和侵袭能力并抑制fak蛋白的表达。

摘要：黏着斑激酶（fak）是一种相对分子质量为125 000的非受体型蛋白酷氨酸激酶，具有独特的结构功能特征，在细胞内信号转导中起关键性的作用，有胞内第一信号之称。我们以fak基因为靶点，设计其两条反义寡脱氧核苷酸，通过直接注射瘤体的方法，观察其在动物实验中的抑瘤效果。

摘要：目的 探讨RNA干扰技术抑制黏着斑激酶（fak）基因表达增强人胰腺癌PANC-1细胞对化疗药物敏感性及凋亡能力的研究.方法 针对fak mRNA序列设计合成短发夹状干扰RNA（siRNA）的DNA模板,构建pRNAT-fak重组表达载体,转染人胰腺癌PANC-1细胞;通过RT-PCR分析其对PANC-1细胞内源性fak表达的影响;激光共聚焦显微镜检测PANC-1细胞凋亡的形态学改变;用四甲基偶氮唑蓝法观察PANC-1细胞对化疗药物吉西他滨敏感性的改变;采用分光光度计检测 Caspase 活性.结果 成功构建 pRNAT-fak重组质粒,并成功转染PANC-1细胞;RT-PCR证实重组质粒在mRNA显著抑制fak基因表达（P＜0.01）;吉西他滨组及吉西他滨加pRNAT-fak组细胞则检测出明显的细胞凋亡;四甲基偶氮唑蓝结果证明在和吉西他滨联合作用下,pRNAT-fak组PANC-1细胞的生长抑制率明显增高（P＜0.01）;Caspase 3活性明显高于空白对照绀和阴性对照组.结论 pRNAT-fak可抑制fak在人胰腺癌PANC-1细胞中的表达,并增强PANC-1细胞对吉西他滨敏感性.

摘要：通过对强夯地基土的载荷试验成果和重型(Ⅱ)动力触探值N63.5进行相关分析,建立强夯地基承载力特征值fak、变形模量E0与重型(Ⅱ)动力触探N63.5值之间的相关方程。探讨利用重型(Ⅱ)动力触探N63.5值确定强夯地基土的强度和变形指标的可行性。

摘要：0 引言我国为肝细胞癌(HCC)高发区,目前大肝癌切除术后5年复发率为60%～80%,小肝癌亦达到40%～50%.如何降低复发率、提高无瘤生存率就显得甚为重要和迫切[1].如果能在早期发现HCC的转移复发倾向,并以此指导临床治疗,那么必将促使HCC疗效实现一次飞跃.欧美发达国家为HCC低发区,故关于HCC侵袭转移的研究较少.然而在一些恶性肿瘤中已发现一种调节细胞形态和运动的细胞质内蛋白质酪氨酸激酶--粘着斑激酶(focal adhesion kinase,fak)表达的改变,并与肿瘤细胞的侵袭和转移显著相关.国内尚未见关于HCC中fak蛋白表达情况的研究报告.故本实验设计用免疫组化技术检测在HCC、肝硬化及正常肝标本中fak的表达情况.

摘要：目的paxillin特定残基的磷酸化参与调控局部黏着斑(focal adhesions,FAs)的周转,继而影响细胞的运动与迁移,可由于缺少可靠工具,paxillin参与机械应力传递与信号转导的途径仍不明确。方法基于荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)原理,以paxillin Tyr31和Tyr118的磷酸化水平作为衡量其活性的标准,设计并构建能够可视化检测paxillin活性的活细胞探针ELSY。对细胞施加剪切应力及改变胞外基质(extracellular matrix,ECM)硬度,通过解聚重要胞内物理结构及抑制paxillin相关信号蛋白的活性,探究并比较不同类型胞外机械刺激激活胞内paxillin途径的异同。结果剪切应力无法直接激活胞浆中的paxillin;胞浆中paxillin的活性随ECM硬度的增加而增强,ECM硬度对paxillin活性的调控主要受整合素、fak及Src构成的信号通路调控,与细胞膜与细胞骨架构成的胞内物理结构无关。结论不同胞外机械刺激调控活性的途径并不相通,剪切应力对paxillin的激活与paxillin的亚细胞定位密切相关,应力信号在FAs内的传递很可能是其中的关键因素;ECM硬度激活胞浆中paxillin的过程与胞内应力信号的传递无关,主要受整合素调控,间接受fak及Src的调控。