摘要：根据牛的成纤维细胞内生长因子5(Fibroblast growth factor 5,fgf5)基因cDNA序列设计引物,PCR扩增得到绵羊fgf5基因cDNA的开放阅读框序列,并比较和其他6种高等哺乳动物的序列同源性;同时研究该基因在绵羊多种组织的表达情况,以及研究以细胞模型RNA干扰下的表达情况。结果表明,绵羊fgf5基因ORF全长为813 bp,编码270个氨基酸,分子量约为29.58 kDa,理论等电点10.59。绵羊fgf5基因cDNA序列与牛、人、小鼠、大鼠、犬和猫的对应序列同源性高度保守,预测氨基酸序列同源性同样具有高度保守性。RT-PCR分析表明fgf5在绵羊皮肤、小肠、肾脏、心脏、肝脏、脾脏、胰脏和肺中均有表达,皮肤中表达量最高。构建该基因的原核表达载体和RNAi载体,IPTG诱导在大肠杆菌中融合表达获得55 kDa的蛋白条带,设计的RNA干扰片段能显著抑制fgf5基因的表达。文章为进一步阐明绵羊fgf5的功能尤其是在羊毛生长发育中的作用提供了理论和实验基础。

摘要：根据fgf5基因已知DNA序列设计了2对引物,采用PCR-SSCP和PCR-RFLP技术,在内蒙古绒山羊群体中进行基因多态性检测,结果发现fgf5基因外显子1存在限制性内切酶BglⅠ多态位点。对其不同基因型个体PCR回收产物进行测序,测序结果发现该SNP是由碱基序列C→T的突变而引起的。基因型和基因频率统计,该实验群体以等位基因A具有明显的优势,χ2检验表明该SNP位点的基因频率处于Hardy-Weinberg平衡状态;对该SNP与绒毛性状关联分析,表明该SNP对绒纤维伸直长度(P0.05)。AB基因型个体绒纤维伸直长度(P<0.01)和含绒量(P<0.05)显著高于AA基因型个体。

摘要：拟利用CRISPR/Cas9技术建立编辑fgf5基因的绒山羊细胞株。在fgf5基因的第一外显子设计靶点并合成gRNA靶点引物,构建2个编辑fgf5基因的Cas/gRNA真核表达质粒载体。电穿孔法转染绒山羊成纤维细胞后T7核酸内切酶(T7E1)检测载体活性,选择活性最高的载体转染细胞,单细胞接种并扩繁,提取基因组DNA,PCR及测序鉴定。经测序分析共获得20个fgf5基因敲除细胞株(包括fgf5+/-和fgf5-/-),总突变率为14.81%。双敲除突变细胞株可作为供体细胞进行重构胚构建,为创造高产绒性状的fgf5基因编辑绒山羊奠定基础。

摘要：在小鼠fgf5基因干扰的研究中,针对小鼠fgf5mRNA的第316～335bp区域、第499～518bp区域和第766～785bp区域分别设计了发夹式RNA干扰片段,并将干扰片段连接到带有H1启动子的红色荧光表达载体上,将载体以脂质体法转染到eGFP转基因小鼠胎儿成纤维细胞中,搜集转染后的细胞提取总RNA,并反转录成cDNA。用SYBRGREENⅠ荧光定量PCR方法对转染了不同干扰载体的细胞cDNA进行检测,结果干扰载体对eGFP转基因小鼠成纤维细胞中的fgf5表达有较强的抑制作用。