摘要：口蹄疫病毒3C蛋白酶在病毒的致病机理、聚蛋白前体的加工和RNA的复制上起着很重要的作用,是当前抗病毒研究的一个重要靶点。本研究从AsiaⅠ型fmdv适应细胞毒中提取RNA,用RT-PCR技术扩增3C基因,首先克隆到pGEM-T载体,再亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacB中,构建出重组转移载体pMel-3C。最后将含有目的基因的转移载体与线性化的杆状病毒DNA共转染Sf9细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了重组杆状病毒。重组病毒经扩增后以10个MOI感染Sf9细胞,接种病毒72h后收获细胞,样品经SDS-PAGE和Westernblot证实3C蛋白获得表达,分子量约23kDa,与预测蛋白大小一致,且能被fmdv感染阳性血清所识别。本研究为空衣壳的体外组装及新型抗病毒药物设计的研究奠定了基础。

摘要：筛选靶向fmdv受体猪源整联蛋白αV亚基基因抑制fmdv复制的最佳siRNA。根据猪源αV mRNA序列,设计并合成siRNA,Lipofectamine 2000转染siRNA于PK-15细胞,利用qRT-PCR检测RNAi组(iαV-480、iαV-1719和iαV-2077)、空白组(Mock)和阴性对照组(Control)中αVmRNA表达情况;在转染siRNA12h后通过接种100TCID50,收集病毒液,测定TCID50,确定其抗病性变化。结果显示,瞬间转染PK-15后,与阴性对照组和空白组相比,3个RNAi组均不同程度抑制αV亚基基因表达,在24hiαV-480组在mRNA水平抑制90.1%,作用最明显。TCID50测定表明iαV-480组有较低的病毒滴度,说明其抗病性增加。针对猪源整联蛋白αV亚基基因的最佳siRNA的筛选成功,为深入研究干扰fmdv受体抗fmdv转基因路线奠定了基础。

摘要：根据已测得的O/China/99口蹄疫病毒(fmdv)基因组序列,设计两对特异性表达引物,以带有O/Chi-na/99 3ABC基因片段的重组质粒pGEM-3ABC为模板,扩增得到了3A、3B基因,通过两端的BamHI和SalI酶切位点插入原核表达载体pET28a,将重组表达质粒转化宿主菌BL21,用IPTG诱导表达目的蛋白.表达产物经SDS-PAGE检测表明,3A和3B基因成功的在大肠埃希氏菌中得到了表达;通过Western blotting分析和斑点ELISA分析表明,纯化后的蛋白能与fmdv感染动物血清发生特异性反应.

摘要：为研究肿瘤进行性位点2(TPL2)在仓鼠肾细胞(BHK-21)中对口蹄疫病毒(fmdv)复制的影响,使用fmdv感染BHK-21细胞,通过qRT-PCR技术检测fmdv感染对内源性TPL2转录水平的影响;根据GenBank公布的TPL2基因序列(NM007746.2)设计构建TPL2的真核表达质粒以及设计并合成宿主TPL2的RNAi序列,利用脂质体方法转染BHK-21细胞,通过qRT-PCR和Western blotting技术分析TPL2在BHK-21细胞过表达和干扰对fmdv复制的影响。结果表明,fmdv感染BHK-21细胞后,TPL2转录水平显著上调;过表达TPL2能够促进fmdv在BHK-21细胞中复制,而下调表达内源性TPL2后fmdv的复制受到抑制,表明TPL2促进fmdv在BHK-21细胞中进行复制,本结果进一步拓展了我们对fmdv与天然免疫机制之间关系的认识,同时为TPL2的相关研究积累了科学资料。

摘要：根据口蹄疫病毒(fmdv)China99流行毒株基因序列设计特异引物,以阳性质粒pGEM-p1为模板,扩增p1基因。p1片段经Nco和Xho酶消化后,得到目的基因VP2-3-1,将其与经相同酶消化的表达载体pProEx-HTb连接并转化BL21(DE3),经PCR、酶切鉴定和序列分析筛选阳性克隆,经IPTG诱导后SDS-PAGE检测,结果表明VP2-3-1基因得到表达;Westernblotting结果显示,该表达蛋白能被口蹄疫病毒阳性血清所识别。

摘要：在比较国内外口蹄疫病毒 (fmdv)流行毒株序列的基础上 ,设计了检测 fmdv的 PCR引物及 O型 fmdv不同基因型即中国型 (Cathay)与乏亚株 (Pan Asia)的二联 PCR引物。在确定单项 RT- PCR反应条件的基础上 ,建立、优化了二联 RT- PCR反应体系和条件 ,并进行了相关病毒检测试验。结果表明 ,建立的检测 O型 fmdv不同基因型中国型与泛亚株的二联 RT- PCR,有效、特异且敏感 ,为 FMD的诊断。

摘要：为探讨siRNA在哺乳动物细胞中对口蹄疫病毒(fmdv)2B基因的抑制作用,针对WFL株fmdv的2B基因,设计了4个siRNA,并将shRNA表达模板插入pSilencer1.0-U6载体,构建shRNA表达质粒,将其与含绿色荧光蛋白报告基因的pEGFP+2B融合表达质粒瞬时共转染BHK-21细胞,以荧光显微镜和流式细胞仪检测荧光表达量的变化,以实时定量RT-PCR法检测对2B基因mRNA的抑制作用。结果表明,本试验所构建的针对2B基因的shRNA表达载体可以在BHK-21细胞中抑制2B基因的瞬时表达。

摘要：口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、高度接触传染性和可快速远距离传播的动物疫病,可感染猪、牛、羊等多种主要家畜,造成巨大经济损失,引发严重的负面社会影响。世界动物卫生组织将其列在A类动物疫病名单之首,我国政府将其排在一类动物传染病首位,这充分显示了国内外对该病的重视程度。预防和控制牲畜口蹄疫是各级政府所面临的紧迫而严峻的课题,目前疫苗免疫仍是预防该病的主要措施之一。本文通过对国内外口蹄疫疫苗的研究情况进行归纳总结,为今后口蹄疫新型疫苗的设计开发提供新的思路和参考。

摘要：这种重组牛痘病毒可以表达口蹄疫病毒(fmdv)C3Arg85株4种结构蛋白的前体,其构成是使用一种基于蚀斑形成的方式分离重组牛痘病毒的步骤来设计并生成这种疫苗。成年鼠接种这一重组牛痘病毒之后,诱导了抗同源性fmdv和牛痘病毒的很高滴度的中和抗体,通过中和试验可测出。使用全部病毒作为抗原进行液相阻断夹心ELISA_s,能显示出很高的抗同源性fmdv的总抗体滴度。

摘要：尽管多次尝试设计新的疫苗,但至今仍未有可用的传统口蹄疫疫苗替代品。本试验研究了对猪免疫两种试验性DNA疫苗的不同结果,这两种DNA疫苗分别表达1个B细胞表位和2个T细胞表位,均在pCMV-BTT中单独表达或与一个强信号肽在pCMV-spBTT中融合表达。虽然所有注射了pCMV-spBTT的猪在fmdv攻毒后都表现出病变严重程度的减轻和发病的延迟,但注射了pCMV-BTT的猪病情恶化且大多数猪在感染10 d后仍有病毒血症,直至试验结束,对fmdv的免疫效果不理想。值得注意的是,4头注射pCMV-spBTT的猪中仅有1头在攻毒前检测到中和抗体,表明对fmdv的部分保护可能在不存在中和抗体的情况下获得。