摘要：为调查云南大理州一处奶牛养殖小区BEFV的感染情况及其流行毒株g基因的遗传多样性。对该大理州奶牛养殖小区的10份疑似病例,参考genBank中牛流行热病毒的g基因序列,设计并合成2对特异性扩增g基因,测序并完成序列分析。同时,采60份血清样本进行抗体检测。结果显示,对10份疑似BEF病牛全血样的检测结果,6份呈BEFV核酸阳性。去除重复序列,获得4株牛流行热病毒云南流行株g基因扩增、测序,序列全长均为1872 bp,编码623 aa。4株毒株之间组内核苷酸序列相似性为99.7%~99.9%,遗传进化分析与亚洲毒株聚为一类,并独自为一个细小分支。与泰国2017年分离TH-NP0065毒株和中国的毒株关系最近。与我国疫苗株JB76H的氨基酸同源性比较,发现7个氨基酸突变位点,为K^(53)→N^(53)、K^(62)→R^(62)、P^(183)→S^(183)、g^(263)→E^(263)、K^(461)→E^(461)、K^(457)→R^(457)、I^(475)→M^(475)。除中和抗原位点g1外,g2、g3、g4均出现变异位点。抗体检测试剂盒检测结果,抗体浓度≥52.5 ng/L临界值的样品有19份,阳性率为31.67%。综上所述,该奶牛养殖小区存在BEFV的感染,且流行株g基因存在多位点变异。

摘要：为了解牛流行热病毒(BEFV)山东流行株g基因的特点,从临床病料中获得山东流行株牛流行热病毒的g基因,并对其进行序列测定和分析。参考genBank中牛流行热病毒的g基因序列,设计并合成一对特异性扩增g基因引物进行PCR,扩增目的片段,并克隆于pEASY-T3载体上,筛选阳性重组质粒进行序列测定,用MEgA软件、NJ法构建进化树。结果显示,该流行毒株g基因与genBank中其他BEFV株g基因的核苷酸推导氨基酸的同源性均大于96%;遗传进化关系分析结果表明,BEFV山东流行株与中国台湾流行株具有较高同源性和较近的亲缘关系。

摘要：为获得狂犬病毒g基因并在大肠杆菌中进行表达,进而初步建立用于评价狂犬疫苗免疫效果的方法,根据狂犬病病毒RV(rabies virus)ERA株g基因序列设计引物,从病毒中提取出RNA,经逆转录并扩增得到RVg基因;将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建重组质粒PET-RVg并转化到大肠杆菌BL21(DE3)gold中,经IPTg诱导表达并确定表达的最佳条件;Ni亲和层析柱纯化获得重组g蛋白,并以g蛋白为抗原建立检测狂犬病毒抗体的间接ELISA方法.检测结果表明,经灰度分析纯化后纯度可达96%.

摘要：[目的]分析广东省牛流行热病毒(Bovine ephemeral fever virus,BEFV)分离株JM 2020与其他地区毒株的进化关系,阐明遗传进化与全基因组的特征,为中国乃至世界对牛流行热疾病的流行情况以及预防该疾病提供有用信息。[方法]根据从genBank下载的BEFV毒株的全基因组序列信息,设计引物PCR扩增糖蛋白(glycoprotein,g)基因;另设计10对引物用于扩增全基因组,送测序得到10个片段的基因序列,运用DNAStar软件中的EditSeq手动编辑和拼接获得全基因组序列。运用MEgA 6.0分别构建g基因和全基因组进化树进行进化分析。[结果]JM 2020毒株的g基因和全基因组与泰国毒株的核苷酸序列相似性均最高,分别为94.9%~99.3%和99.0%,进化分析表明JM 2020与2013—2017年泰国毒株处于同一小分支,而与JB76H、JT02L等国内毒株有一定进化距离。全基因组测序结果表明,JM 2020全基因组长度为14 902个核苷酸(nt),包括50 nt的前导序列,1 296 nt的核蛋白(Nucleoprotein,N)基因,837 nt的磷蛋白(Phosphoprotein,P)基因,672nt的基质蛋白(Matrixprotein,M)基因,1 872 nt的g基因,1 812 nt的非结构糖蛋白II (Non-structural glycoprotein II,gNS)基因,618 nt的α1、α2基因,444 nt的β基因,345 nt的γ基因,444 nt的RNA依赖性聚合酶(Large multi-functional enzyme,L)基因和73 nt的尾随序列,且分别被21、47、68、67、23、64、59、79和35nt的区域隔开。JM 2020、qy2017及泰国毒株均出现P′基因(P基因多顺反子产物)截断的特征。[结论]JM2020毒株与2017年分离毒株qy2017序列相似性高且均与泰国毒株进化关系较近,与JB76H等我国其他地区毒株有一定进化距离。该研究丰富了中国BEFV流行株的基因组信息,为牛流行热疫病综合防控及开发新疫苗奠定了基础。

摘要：目的 探讨环境因素、日常生活方式、社会心理因素及其与-2518MCP-1、CCR2-64I、SDF1-3’A基因交互作用在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。方法 采用病例对照研究设计,用单因素和多因素非条件logistic模型分析影响SLE发病的因素,用非条件logistic模型分析基因-环境交互作用。结果 单因素logistic回归分析共发现19个因素与SLE发病有关,多因素logistic模型分析显示,有意义的变量共5个,其中饮井水为SLE的保护因素(OR=0.099),而多种药物过敏(OR=8.174)、阳光过敏(OR=18.339)、服用抗生素(OR=5.626)、口服避孕药(OR=16.897)为SLE发病的危险因素。非条件logistic模型分析发现在SLE发病中好食刺激性食物与-2518MCP-1g/g基因型存在交互作用(OR=4.387)。未发现SLE发病中存在环境与环境的交互作用。结论 多个环境危险因素与SLE的发病有关,而且MCP-1基因与好食刺激性食物间存在交互作用。

摘要：参照genBank中水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)g蛋白基因的核苷酸序列,设计合成1对特异性引物,采用RT-PCR方法扩增约为810bp的g基因片段,并将其克隆到pgEX-4T-1表达载体上,将经PCR、酶切鉴定以及测序分析正确的阳性重组质粒命名为PgEX-g810,之后将其转化至表达菌株*** BL21(DE3),经IPTg进行诱导表达;表达产物经SDS-PAgE、Western blotting等方法进行检测。SDS-PAgE结果表明,重组蛋白主要以包涵体形式存在,相对分子质量约为60 000;包涵体经变性、复性、glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化后,分离得到复性的融合蛋白。纯化的融合蛋白能与VSV阳性血清发生特异性免疫反应,证明表达的目的蛋白具有良好的抗原性。

摘要：根据水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae ***,Xooc)hrp基因的序列设计引物,通过PCR方法从水稻白叶枯病菌JXOIII和PXO99A菌株中扩增得到核苷酸序列完全一致的hrp基因,以该基因为探针与JXOIII／pUFR034基因组文库中含有hrpX克隆pUHRX245(36.8kb)的4个亚克隆进行southern blot分子杂交,确定在亚克隆pB1中1.3 kb大小的片段和AE4(3.0kb)片段中存在hrpg同源序列.测序结果表明,在pB1中有586个碱基序列,在AE4中有206个碱基,共同构成完整的hrpg基因,且与已知的hrpX基因是毗邻的.以同样方法从水稻白叶枯病菌PXO99A菌株的hrp-突变体M16中扩增得到hrpg基因对应位置的同源突变序列.序列分析表明其有意义突变为541位的C→T的突变,从而导致亮氨酸变为苯丙氨酸(Leu→Phe).将hrpg基因和突变序列分别导入突变体M16中,转移结合子M16/hrpg(PXO99A)恢复了其在烟草上的过敏反应和在水稻上的致病性,而突变序列的结合子M16／hrpg(M16)则不能使其恢复功能,从而确定M16是由于单个碱基的突变所引起的功能突变.经过对基因及其产物的比对发现,对于第Ⅱ组hrp调节基因hrpg的变异,种间变化明显高于种内不同致病变种的变化.

摘要：试验旨在开发一种特异性检测B亚型禽偏肺病毒(aMPV-B)的方法。研究参照genBank中的aMPV-g基因序列设计一对特异性引物,建立aMPV-B TaqMan荧光定量PCR方法,优化该方法的反应条件,建立标准曲线,进行特异性、重复性和敏感性试验,并将该方法用于临床样品的检测。结果显示:建立的TaqMan荧光定量PCR方法只能检测出B亚型aMPV,其敏感性能达到1.34×10^(1) copies/µL,斜率为-3.346,截距为40.01,相关系数(R2)为1.00,循环阈值(Ct)与模板拷贝数之间呈现良好的相关性;临床样品检测结果显示,该方法检测出18份样品阳性,而普通PCR仅检测出10份阳性。综上所述,建立的aMPV-B TaqMan荧光定量PCR方法在样品检测中表现出良好的特异性和较高的敏感性,适用于临床样品的aMPV-B检测。

摘要：为建立牛流行热病毒(BEFV)的荧光定量PCR检测方法,本研究根据genBank中已登录的BEFV的g基因保守序列设计了1对特异性引物。结果显示,建立的标准曲线线性关系较好,其相关系数为0.996 3。该方法仅对BEFV检测为阳性,表明其特异性强。该方法的检测下限约为4.0×10^1 copies/μL,比普通PCR敏感性高10倍。重复性试验结果显示,该方法的组内和组间变异系数均小于0.76%。利用本方法分别对45份牛病料样品进行检测,结果检出了11份阳性样品,表明所建立的荧光定量PCR方法准确可靠,可以用于BEFV的快速诊断和定量分析。