摘要：对近年来Ｇ蛋白和Ｇ蛋白偶联受体的研究进行了综述。着重阐明了Ｇ蛋白及其偶联受体的结构和功能。通过建筑Ｇ蛋白偶联受体的三维结构模型来研究受体与配基的相同作用，从而设计合成有效化合物。同时，在研究新药时，不仅要研究与Ｇ蛋白偶联受体相关的药物，而且要考虑Ｇ蛋白抑制剂或激动剂以及与效应器有关的药物，这样有可能提高设计命中率。

摘要：根据所有已知 g 蛋白β亚基的保守区设计简并性寡核苷酸引物,通过3′-和5′-RACE方法结合 RT-PCR 技术,从麦长管蚜中分离全长 cDNA 序列,并用半定量 RT-PCR 的方法研究基因在不同组织的转录水平。克隆的β亚基序列全长1336 bp,编码区1023 bp,编码340个aa,推测的分子量为37.27 kDa,等电点为5.56。genBank BLAST 结果表明,β亚基与冈比亚蚊 Anopheles gambiae 的氨基酸序列同源性最高,为93%,与果蝇 Drosophila melanogaster β_1的同源性为90%,与线虫 Caenorhabditis efegans 的同源性为85%,与哺乳动物β_2的同源性为80%。该亚基在麦蚜头、胸和腹部都能表达,但在头部的表达量最高,推测该种类型的β亚基可能参与多种信号传导途径的调控。该基因首次从麦蚜中克隆到,命名为 Savgβ,在 genBank中的登录号为 AY205294。

摘要：异三元g蛋白是真核细胞感知外界信号后将信号传递到胞内的重要分子,在生物中参与了广泛的信号转导途径,如光、神经递质和激素等。为了研究g蛋白在家蚕Bombyxmori中的生理功能及其作用机理,我们运用生物信息学方法在已有的家蚕基因组数据库中找到了一段与g蛋白alpha亚基(gα)同源性很高的序列。通过设计特异性引物,运用PCR和RACE技术,成功地克隆了一个家蚕gα基因的全长cDNA序列。该基因全长1509bp(genBank登录号:EU914850),开放阅读框(ORF)为1158bp,编码385个氨基酸。Blast和DNAstar等软件分析发现该基因编编码的蛋白质与其他物种已知的gα具有一定的保守性,将它命名为Bmgα73B。RT-PCR扩增检测该基因在家蚕不同组织器官和不同发育时期的转录表达活性,结果表明它在不同发育时期的家蚕各组织器官中都有表达。从组织水平上看,Bmgα73B在中肠中表达量最高,在马氏管、头部和神经索等组织中也有适量表达。在家蚕的不同发育时期中,转录水平峰值出现在幼虫期,在蛹早期也有适量的表达,而在预蛹期、蛹后期和成虫期几乎没有表达。结果说明Bmgα73B可能参与了家蚕生长前期的中肠发育过程,为进一步研究g蛋白在家蚕发育过程的作用奠定了一定的基础。

摘要：用自行设计的TaqMan双标探针和扩增引物建立检测鸟苷酸结合蛋白(g-protein)mRNA的实时荧光定量RT-PCR技术.用g蛋白纯品绘制定量标准曲线,实时荧光定量PCR仪检测ECV304细胞和小鼠g蛋白mRNA水平.10μmol/LgqαmRNA反义寡核苷酸(gqαODN)作用ECV304细胞24h后,gqα的mRNA表达显著下降(3.18×108±1.75×108拷贝下降到1.44×106±4.82×105拷贝),48h和72h下降更明显;gsα和gi2α的mRNA表达变化不显著.10μmol/LgsαmRNA反义寡核苷酸(gsαODN)作用ECV304细胞24h后,gsα的mRNA表达显著下降(2.97×108±2.68×107拷贝下降到4.16×106±2.00×106拷贝),48h和72h下降更明显;gqα、gi2α表达变化不显著.小白鼠油酸致伤后6h,gqαmRNA表达显著下降(1.16×108±8.73×106拷贝下降到3.30×106±1.68×106拷贝),24h下降更显著(9.32×107±1.47×107拷贝下降到4.14×106±1.67×106拷贝);gsα和gi2α表达变化的趋势同gqαmRNA.结果准确可靠,重现性好.说明建立的实时荧光定量RT-PCR方法成功地实现了对ECV304细胞和小白鼠肺组织g蛋白不同亚型不同丰度基因表达的检测.

摘要：根据g蛋白gβ1亚基的保守序列设计简并引物,通过简并PCR和RACE技术,克隆到凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)gβ1基因的全长cDNA序列。利用Blast、DNAstar和genedoc软件分析,发现该gβ1编码的蛋白序列与其他物种已知的gβ1序列具有相当高的保守性,将它命名为pvgβ1。免疫共沉淀分析发现pvgβ1能在体外适当条件下与对虾gαs或gαq相互结合。Westernblot-ting分析发现,pvgβ1在对虾身体各部位都有广泛分布,尤其在脑神经、眼和眼柄有大量表达。说明了gβ1在对虾的神经系统和光信号传导等生命过程中的重要性。

摘要：本研究旨在获得重组牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)g蛋白并对其进行反应原性鉴定。从NCBI上找出g基因的核苷酸序列,分析其抗原区域,利用Primer Premier 5.0软件设计1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增BRSV g基因片段,将目的片段连接到克隆载体pMD19-T后,对其进行双酶切鉴定和测序。将双酶切后的目的片段进行胶回收,构建重组质粒pET-32a-g,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用Ni-IDA亲和层析法纯化经IPTg诱导表达的蛋白,并测定其浓度;通过SDS-PAgE和Western blotting方法对该蛋白进行分析与鉴定。结果显示,本试验成功克隆出大小约为567 bp的g基因,获得分子质量约为40 ku的可溶性重组蛋白,优化诱导条件后用SDS-PAgE对表达产物进行鉴定,在16℃、IPTg浓度1.2 mmol/L、诱导4 h时蛋白表达量最大;通过Western blotting检测发现,重组蛋白可与山羊源BRSV标准阳性血清发生特异性反应,说明该蛋白具有反应原性。综上,本研究成功表达并纯化了BRSV g蛋白,为建立BRSV抗体间接ELISA检测方法和BRSV亚单位疫苗的研制奠定了基础。

摘要：【目的】获得能特异性识别大口黑鲈弹状病毒(Micropterus salmoides rhabdovirus, MSRV)g蛋白的多克隆抗体,为后续MSRV双抗夹心法胶体金试纸条的研制提供材料。【方法】根据genBank上MSRV g蛋白的基因序列(genBank登录号:OK272491.1)设计扩增其胞外区的特异性引物,以感染MSRV的gS细胞的cDNA为模板,通过PCR扩增获得目的序列,双酶切后连接至pET-28a(+)表达载体构建重组质粒pET-28a-Δg,将重组质粒转化大肠杆菌Trans5α感受态细胞。挑取测序正确的阳性克隆提取重组表达质粒pET-28a-Δg,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,再次挑取阳性克隆,测序正确后用IPTg诱导表达。目的蛋白经Ni-NTA树脂层析柱纯化后免疫BALB/c雌性小鼠,4次免疫后眼眶采血获得抗MSRV g蛋白的多克隆抗体,最后通过ELISA、Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定多克隆抗体的效价和特异性。【结果】PCR结果显示,获得大小为1 323 bp的目的条带。SDS-PAgE结果显示,构建的重组表达质粒可高效表达目的蛋白,Ni柱纯化后获得单一目的蛋白,分子质量在48.5 ku左右,与预期相符,且纯度符合免疫原要求。ELISA结果显示,制备的多克隆抗体效价为1∶204 800。Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体可特异性识别不同批次的MSRV g蛋白。IFA结果显示,制备的多克隆抗体能特异性识别天然状态下的g蛋白。【结论】本研究利用MSRV g蛋白的胞外区重组蛋白成功制备出能特异性识别MSRV g蛋白的多克隆抗体,为后续MSRV的免疫检测和疫苗开发奠定了基础。

摘要：异三元g蛋白是真核细胞感知外界信号后将信号传递到胞内的重要分子,参与生物体广泛的信号转导。为了研究家蚕体内g蛋白的生理功能及其作用机制,运用生物信息学方法预测了家蚕g蛋白γ1亚基(gγ1)的序列,设计引物验证预测序列后,克隆了家蚕gγ1的序列,再通过酶切克隆至表达载体pET-41b(+)后,导入***21宿主菌中,经异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTg)诱导表达重组谷胱甘肽硫转移酶(glutathione s-transferase,gST)融合蛋白,并亲和层析纯化表达产物。家蚕gγ1重组gST融合蛋白经SDS-PAgE电泳和Western blot分析,在分子质量约36 kD处出现特异性蛋白条带,重组蛋白经gST亲和层析柱纯化后,得到了高纯度的融合蛋白,说明已经成功克隆到家蚕gγ1基因,并在***21中高效表达。

摘要：本文主要针对以g蛋白亚单位基因家族等信号转导分子研究进展为基础的创新药物分子设计新策略进行概述。就g蛋白的分子结构及其亚单位基因分类 ;g蛋白亚单位的基因结构特点 ;g蛋白活性的调节包括g蛋白激活剂、g蛋白拮抗剂和g蛋白信号转导调节因子 ;基于信号转导分子的药物设计策略 ,包括g蛋白分子与药物作用靶点、Ras和其他小分子量g蛋白、细胞周期分子、核受体与转录因子、信号转导的抑制剂等进行讨论 ,并对其前景进行了展望。

摘要：根据拟南芥（ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｈｌｉａｎａ）ＧＰＡ１的保守区段Ａ设计一对特异引物（５′ｃｔｇｇｇｇａａｔｃｔｇｇａａａａｔｃ３′，５′ｃａｃａｇｃｔｇｔａｃａｃｃｔｃａａａｃ３′）通过ＰＣＲ从丝瓜核基因组中扩增植物的三聚体Ｇ蛋白α亚基编码基因，获得了２个片段（ＬＦＧ１，ＬＦＧ２），并已克隆和测序（已在ＥＭＢＬ数据库中登记，登记号为：ｙ１５２７０，ｙ１５２７１）．序列分析表明ＬＦＧ１和ＬＦＧ２分别由１５１５ｂｐ和７３２ｂｐ构成，都含有三聚体Ｇ蛋白α亚基编码基因的保守区段Ａ，但也都含有内含子．根据片段的大小及ＰＣＲ的特性，ＬＦＧ１可能是丝瓜三聚体Ｇ蛋白α亚基编码基因上的片段．