摘要：介绍了g蛋白的结构和种类,对g蛋白参与视觉传输、高血压和心律失常的调节,失血性休克的病理调控以及控制肿瘤的发生等方面进行了综述.g蛋白广泛存在于动物的感光器中,在视觉传输过程中起着重要作用;在心律失常时,g蛋白mRNA含量发生明显变化;在失血性休克心肺组织中g蛋白含量发生变化;g蛋白某些亚单位基因的突变可引起亚单位表达的缺失或蛋白表达量的变化,导致某些生理功能障碍,甚至产生癌变.说明g蛋白参与了动物视觉传输过程,参与了心律失常、失血性休克的调控及癌变的发生.对于g蛋白与高血压是否相关存在不同的看法.g蛋白亚单位基因结构的确立,g蛋白的基因克隆和基因表达的调控以及医学新药剂的设计和合成,是今后一段时间研究的热点.

摘要：目的:检测刺激性g蛋白(gS)和抑制性g蛋白(gi)在内淋巴囊上皮的表达,为深入研究g蛋白的功能奠定基础。方法:查阅gs和gi的基因序列,自行设计并委托gibco公司合成引物,应用RT-PCR和原位杂交法检测gas和gai mRNA在内淋巴囊上皮细胞的表达。结果:扩增的gas和gai片段长度分别为340bp和431bp;正常内淋巴囊上皮细胞内可见gs和gi的阳性颗粒。结论:正常豚鼠内淋巴囊上皮细胞存在gas和gai mRNA的表达;g蛋白在内淋巴囊的信号转导和离子通道调节中可能起重要作用。

摘要：基于大肠杆菌原核表达的g重组蛋白缺少糖基化修饰,诱导机体产生中和抗体的能力较弱。为制备g蛋白多克隆抗体,针对g蛋白抗原Ⅳ区第251位氨基酸的中和抗原表位,以日本RABV疫苗株RC-HL的g蛋白序列为模板,设计了含有17个氨基酸的多肽序列MQTSDETKWCPPDQLVN(g17),合成后偶联KLH蛋白,与弗氏佐剂乳化后免疫小鼠,采集血液分离血清获得抗g蛋白多克隆抗体。实验显示,制备的多克隆抗体效价在1∶500以上,在1∶200的稀释度下,可以对原核表达的g重组蛋白、真核表达的g重组蛋白进行Western Blot检测。基于狂犬病病毒g蛋白抗原位点Ⅳ区制备获得的抗g蛋白多克隆抗体具有反应性好及特异性强的特点,能够用于检测g重组蛋白,为进一步研究g蛋白功能、研发单抗和设计疫苗打下良好基础。

摘要：目的拟通过合成1-磷酸鞘氨醇受体3（sphingosine 1-phosphate Receptor 3, S1PP,3）特异性激动肽并经肉豆蔻酰甘氨酸（myristoyl—glycine）修饰，研究其激活丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases, MAPKs）通路的效应。方法设计合成源自七次跨膜受体S1PR3胞内第2个环的短肽，并经Myristoyl—glycine修饰，命名为gPS-725．017。Westernblot检测gPS-725．017对单核巨噬细胞（THP一1）MAPKs通路关键分子细胞外调节蛋白激酶 （ extracellularregulated protein kinase, ERK）及应激活化蛋白激酶（stress-activated protein kinase, JNK）磷酸化水平的影响。组内或组问不同浓度和不同时间点蛋白灰度值比较采用多因素方差分析。结果与溶剂对照组相比，30Ixmol／L或50μmol／L的gPS-725．017处理THP-1细胞10min，P-ERK水平显著升高[30μmol／L组：（3．10±0．27）vs．（7．98±0．45），P〈0．01；50μmol／L组：（4．78±0．44）vs．（25．98±2．32），P〈0．01]；50μmo]／L的gPS-725．017处理THP-1细胞5min、10min、20min和30min，与溶剂组相比，各时间点p-ERK或p-JNK水平均显著上升（均为P〈0．01）。结论源于S1PR3胞内第2个环并经Myristoyl—glycine修饰的短肽gPS-725．017，可跨膜显著活化MAPKs通路，本研究为临床靶向调控S1PR3，治疗炎症及脓毒症提供理论依据。

摘要：【目的】对加州鲈弹状病毒弱毒三水株(MSRV-SS-7)及其母源株(MSRV-SS)进行全基因组克隆和测序分析。【方法】采用分段扩增方法对MSRV-SS-7及MSRV-SS基因组核心序列进行PCR扩增,第1轮根据鳜鱼弹状病毒(SCRV)基因序列(NC_008514.1)设计10对引物进行扩增并测序;在第1轮扩增产物测序、拼接基础上,设计8对引物进行第2轮扩增,拼接后获得基因组核心序列。同时用cDNA末端快速扩增法(RACE)获得3′和5′末端序列。采用Vector NTI 8.0对基因组核心序列和末端序列进行拼接,获得基因组全序列,使用Clone Manager 8.0对MSRV-SS-7和MSRV-SS进行序列比对分析;同时使用DNAMAN将基因组g基因序列转换为氨基酸序列,并通过MEgA 5.0与其他鱼类弹状病毒的g蛋白氨基酸序列进行进化树分析。【结果】MSRV-SS-7及其母源株MSRV-SS基因组全长均为11548 bp,包含N、P、M、g、L等5个结构基因,基因组结构为3′Leader-N-P-M-g-L-Trailer 5′;MSRV-SS-7与MSRV-SS全基因组中共有10处核苷酸不同。g蛋白进化分析表明,MSRV-SS-7及母源株MSRV-SS与SCRV亲缘关系最近,且与鲈鱼弹状病毒属(Perhabdovirus)聚为一支。【结论】克隆分析了MSRV-SS-7的全基因组序列,可以用于后续活疫苗的开发。

摘要：【目的】克隆传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)CJ-13株糖蛋白(g蛋白)基因,构建原核表达载体,并检测其在大肠杆菌BL21中的表达情况,为IHNV诊断试剂盒和疫苗的研制奠定基础。【方法】设计1对g基因特异引物对g基因进行RT-PCR扩增,将扩增产物克隆到pgEM-T Easy载体上,构建重组质粒pgEM-T Easy-g,经双酶切鉴定、核苷酸序列分析后,将g基因亚克隆到pET-32a(+)原核表达载体上,构建传染性造血器官坏死病病毒g基因原核表达质粒pET-32a-g,转化至宿主菌BL21中,诱导表达目的蛋白,采用SDS-PAgE、Western blot和ELISA等方法对表达产物进行分析。【结果】成功克隆了IHNV g蛋白基因,该基因长度为1 527bp。成功构建了原核表达质粒pET-32a-g,诱导表达出约76ku的产物,与预期分子质量大小相符。Western blot分析结果显示,所表达的g蛋白能够被小鼠抗IHNV血清识别。间接ELISA结果显示,小鼠抗g蛋白血清能够识别IHNV全病毒。【结论】成功构建了IHNV g蛋白原核表达系统,重组g蛋白具有良好的反应原性和免疫原性。

摘要：利用双氧水的氧化性对大豆分离蛋白进行了化学改性研究。分别考察了双氧水用量、反应温度和反应时间等单因素变化对改性效果的影响,并在此基础上设计了正交试验进行参数的优化。试验结果表明,双氧水用量和反应温度是两个关键性因素。最佳反应条件为:20%双氧水加入量为2.4mL/g蛋白,反应温度为40℃,反应时间为35min。

摘要：目的以重组g蛋白为检测抗原,应用间接ELISA方法检测狂犬病病毒抗体。方法根据genBank公布的狂犬病病毒LEP-Flury株基因序列设计引物,PCR扩增出目的基因,连接pgM-T载体,重组质粒经BamH I和XhoⅠ双酶切,连接到表达载体pgEX-6P-1,构建重组表达载体pgEX-g。将重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,在IPTg诱导下表达目的蛋白,表达蛋白纯化后SDS-PAgE电泳分析并经Western blotting鉴定。纯化的g蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA方法检测93份犬血清抗体。结果成功构建了克隆载体pgM-g和表达载体pgEX-g,高效表达了狂犬病病毒g蛋白,融合蛋白分子量大小为79kDa,表达蛋白可与狂犬病病毒抗血清发生特异性反应。建立的检测方法灵敏度达到1∶1 600,与商品化的试剂盒相比符合率为96.8%。结论成功表达狂犬病病毒g蛋白,表达产物可作为检测抗原用于间接ELISA方法中狂犬病病毒抗体的检测。

摘要：目的探讨Rho gTPases相关信号分子的发育规律。方法RT-PCR法检测大鼠发育不同阶段Rho-A、Rac-1、CRMP-1和Tub β3mRNA的表达。结果RT-PCR实际扩增长度与设计长度相吻合。内参照β-actin的PCR产物电泳条带在各个阶段均呈高表达。Rho-A和Rac-1的表达有相似的变化规律,随着海马发育呈明显的阶段性,表达的高峰在胚胎、幼年和老年阶段,而新生阶段和成年阶段处于相对低表达阶段;Rac-1的表达量在海马发育的各个阶段均超过Rho-A的表达量。CRMP-1和Tubβ3的表达从胚胎到成年的各个阶段与CRMP-1的表达具有相似的变化趋势,以胎鼠、新生大鼠和幼年大鼠表达较多,但老年阶段CRMP-1的表达较成年阶段显著升高(P<0.05),而Tubβ3在老年阶段停留在成年阶段的水平。结论大鼠海马发育过程中,Rho-A和Rac-1呈阶段性高表达,CRMP-1和Tubβ3的表达从胚胎到成年逐渐减少,但老年阶段CRMP-1表达再次增多。