摘要：根据Ensembl、Genbank登录的鱼类cat、gapdh和gst基因的CDS序列设计普通PCR扩增引物,寻找食蚊鱼的cat、gapdh和gst基因的c DNA片段,并根据定量引物设计要求设计出相应的SYBR Green I荧光定量RT-q PCR引物,建立了食蚊鱼cat、gapdh和gst基因的SYBR Green I荧光定量RT-q PCR方法。该方法在104~108数量级范围内有良好线性关系(R=0.999~1.000);熔解曲线显示扩增产物特异性良好,均为单一峰值;质粒标准品最高浓度与最低浓度的批内试验变异系数与批间试验变异系数均低于2%。利用该方法监测和评价环境污染物对水生生物的影响,选择了水体中常见典型药物污染物——双氯芬酸,研究其对食蚊鱼抗氧化基因表达的影响。结果表明,雌性食蚊鱼暴露在不同浓度双氯芬酸钠(0.005、0.05、0.5和5 mg·L-1)24 h后,其肝脏cat、gapdh和gst的mRNA呈现显著变化,相对于对照组,在低浓度0.005 mg·L-1时,cat与gst mRNA的表达量均有极显著上升(p<0.01),而其它浓度均极显著下降(p<0.01)。试验表明该方法具有快速、精确、灵敏度高的优点,可为利用该类小型鱼类的原位污染物的生物监测和生态毒理评价提供有力的技术支持。

摘要：根据GenBank中已登陆的gapdh基因的同源核苷酸保守序列,设计简并引物,采用RT-PCR的方法得到5个875 bp的片段,分别命名为Cfgapdh1-Cfgapdh5,GenBank登录号分别为JN177722-JN177726。同时结合RACE方法得到蕙兰gapdh基因cDNA全长,命名为Cfgapdh(JX560732),该序列cDNA全长为1 496 bp,具有完整的开放阅读框(ORF,173-1 195 bp),编码340个氨基酸,该基因编码的氨基酸序列与其他植物的gapdh蛋白有较高的同源性(80%以上)。系统进化分析表明蕙兰Cfgapdh基因核苷酸序列与墨兰gapdh1、gapdh2和春兰gapdh1的同源性最高(99%),所编码的氨基酸序列与墨兰gapdh2的同源性达100%。生物信息学分析推测,该基因编码的蛋白残基主要有两个卷曲螺旋区域,分别位于25和250位点附近,属于不稳定蛋白,亲水性较强,初步推断Cfgapdh是一个胞质型gapdh,二级结构中的β转角所占比例较高(41.2%),三级结构与春兰和小麦非常相似。

摘要：根据已发表的牛支原体gapdh基因序列设计引物,从牛支原体湖北分离株扩增出gapdh基因,亚克隆于载体pET-30a。设计定点突变引物,采用环状PCR法对载体上gapdh基因进行两轮定点突变,原核表达突变成功的重组质粒,获得重组牛支原体gapdh蛋白,经Western-blot证实该重组蛋白具有较好的反应原性,为其在牛支原体病防控中的应用奠定了基础。

摘要：为了分析斑马鱼gapdh基因不同区域原核表达构建的诱导效应差异,应用生物信息技术分析斑马鱼gapdh分子结构,通过定向删除技术,构建表达部分斑马鱼gapdh蛋白片段的质粒。通过IPTG诱导,SDS-PAG检测,分析gapdh基因不同区域构建的蛋白表达差异。结果:引物对ZGCKF/ZGCXR构建的gapdh重组表达质粒具有IPTG诱导表达效应,而引物对ZGNKF/ZGNXR构建的质粒则不具有IPTG诱导表达效应。因此,为了在原核表达真核蛋白时应考虑过表达的真核蛋白是否会影响宿主的代谢以及是否会导致宿主的抵抗,设计引物时应当选择合适的区域构建重组质粒才能获表达产物。

摘要：根据hsp70、hsp90和gapdh基因mRNA序列,设计并合成3对引物,将PCR扩增的基因片段克隆到pGEM-T载体,重组质粒经筛选、鉴定,体外转录出RNA,系列稀释作为阳性标准品,用于标准曲线的绘制和样品检测,并用持家蛋白gapdh基因对样品进行归一化,建立了一步法实时荧光定量RT-PCR技术平台,并对其扩增效率、敏感性、特异性进行了检测。结果证明,建立的一步法荧光定量RT-PCR技术可以真实地反映反应管中模板的数量,可用于猪hsp70、hsp90和gapdh基因mRNA水平的检测。

摘要：目的研究足细胞分子podocin、nephrin和α-actinin之间的相互作用和联系。方法将针对podocin分子设计的特异RNA干扰(RNAi)质粒导入体外培养的小鼠足细胞系(MPC5);应用免疫荧光染色及双标记在共聚焦显微镜下观察nephrin、podocin和α-actinin的分布方式;半定量RT-PCR和免疫蛋白印迹检测podocin、nephrin,α-actinin-4及内参照gapdh/β-actin在mRNA水平和蛋白水平的表达量。结果(1)干扰组podocin的荧光强度显著低于对照组,其mRNA和蛋白的表达量分别下降了65%和89%。免疫双标记显示podocin的分布发生了明显变化:对照组podocin不但分布在胞核的周围,而且在胞浆呈放射性沿着细胞骨架分布,以及主要在胞膜上呈连续性的线状分布;干扰组podocin呈点状分布在胞核周围。(2)干扰组nephrin的荧光强度亦明显减低,其mRNA及蛋白的表达量分别减少了70%和78%。免疫双标记显示nephrin的分布也发生了显著变化:干扰组nephrin亦呈点状分布在胞核周围;在对照组,nephrin和podocin的分布方式相同。(3)干扰组和对照组α-actinin的分布及在mRNA和蛋白水平上的表达量无明显差异,呈细丝状均匀分布于胞质内,亦呈放射性分布于足细胞伸出的突起中。结论通过RNAi成功地使MPC5的podocin表达下调。Podocin和nephrin分子关系紧密,可能存在着?

摘要：采用生物信息学方法对克隆测序的不结球白菜(Brassica campestris ***)Bc gapdh(3-磷酸甘油醛脱氢酶)蛋白质的理化性质、跨膜区、亲水性、亚细胞定位、所含模体及蛋白质结构进行了预测。理化性质分析表明,该酶含有328个氨基酸,相对分子量为35 161.2,p I值为9.03。TMpred跨膜分析表明,该酶没有跨膜螺旋区,这与Prot Scale预测的该酶为亲水性蛋白质相吻合。用Target P server程序预测该酶定位于线粒体上,结构域分析表明该酶含有多种磷酸化位点,二级结构以α-螺旋和随机卷曲为主。借助SWISS-MODEL软件对该酶进行了三维同源建模。

摘要：为获得组成型表达启动子,以褐飞虱的看家基因肌动蛋白(Acting1)与甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(gapdh)为研究对象,以Genbank上褐飞虱Actin1mRNA序列设计嵌套引物,通过灰飞虱gapdh mRNA序列搜寻褐飞虱EST数据库中的同源序列设计嵌套引物,并以设计的嵌套引物通过Tail-PCR技术对褐飞虱Actin 1与gapdh基因ATG前侧翼序列进行扩增。结果表明:通过染色体步移的Tail-PCR技术获得Actin1与gapdh基因ATG前侧翼序列,长度分别为2 878bp和1 196bp。BDGP数据库与PLACE软件在线分析获得核心启动子序列及TATA框、CAAT框和GATA框元件。

摘要：目的:建立单管检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和内参gapdh mRNA表达水平的双重荧光实时定量PCR方法。方法:脂多糖刺激小鼠巨噬细胞Ana-1后提取细胞RNA,经反转录合成c DNA,应用自行设计的不同荧光标记的TNF-α和gapdh引物探针,经PCR扩增后,在FAM通道和CY5通道分别读取Ct值,同时应用基因测序技术对结果进行验证,并构建质粒标准品分析该方法的灵敏度和重复性。结果:双重荧光实时定量PCR法检测TNF-α的灵敏度达4×101拷贝/μL,检测线性范围可达6个数量级,批内和批间重复性好。结论:新方法消除了目的基因与内参的加样误差,节约成本,快速准确,适用于TNF-αmRNA的定量检测。

摘要：无乳链球菌是奶牛乳房炎最常见的病原体之一,其所致感染率高,给治疗带来了极大困难。疫苗是预防无乳链球菌感染的有效手段,但是无乳链球菌的血清型比较多,给疫苗设计带来非常大的困难。随着现代分子生物学技术的发展,应用基因工程技术重组表达来获取高纯度保护性抗原重组蛋白作为疫苗,是一个很好的发展方向。文中对近年来关于无乳链球菌在此方面的研究做一综述。