摘要：在分析马动脉炎病毒gl蛋白抗原性的基础上,设计一对引物克隆gl蛋白一段抗原性较好的抗原域编码基因。将克隆的基因插入pET-32a的BamHⅠ和XhoⅠ之间构建了gl蛋白主要抗原域原核表达载体pET-gl1。将pET-gl1质粒转化BL(21)宿主菌后,对培养和表达条件进行了优化,实现了EAV gl蛋白主要抗原域的高效表达。免疫印迹试验表明获得的表达产物具有良好的反应原性。应用***亲和层析柱纯化重组EAV-gl1蛋白,以纯化的重组gl1蛋白作为检测抗原,初步建立了检测马动脉炎病毒抗体的igl1-ELISA。结果表明,抗原的最佳包被浓度为9.65μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶80,阳性标准初步定为:待检血清OD490>0.4,且待检血清OD490/阴性血清OD490>2。应用igl1-ELISA对马血清样品进行检测,结果表明igl1-ELISA与病毒中和试验的符合率达到94.1%,与国外同类试剂盒的符合率达到95.6%。