摘要：目的构建弓形虫致密颗粒蛋白gra8的真核重组表达质粒。方法设计gra8的特异引物,采用多聚酶链反应(PCR)技术从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码gra8的基因片段,经克隆至pMD18-T载体后,亚克隆至真核表达载体pVAC而构建真核重组表达质粒pVAC-gra8,转化大肠杆菌DH5α;将构建的真核重组表达质粒pVAC-gra8转染vero细胞,分析转染vero细胞中gra8的表达状况。结果PCR扩增出gra8基因的特异片段,所获克隆的序列正确,并被亚克隆到真核表达载体pVAC,构建了真核重组表达质粒pVAC-gra8;在vero细胞中获得表达。结论成功构建了gra8的真核重组表达质粒pVAC-gra8。

摘要：目的　构建弓形虫RH株致密颗粒抗原gra8的原核和真核重组表达质粒。方法　参照gra8序列分别设计引物 ,采用PCR从弓形虫RH株基因组DNA中分别扩增出编码gra8的基因片段 ,克隆至 pMD18-T载体 ;菌落PCR鉴定阳性克隆并测序分析 ;各组阳性克隆的质粒分别亚克隆至原核表达质粒pGEX - 4T - 2和真核表达载体 pVAX1,分别转化大肠杆菌BL2 1和JM10 9,PCR和酶切鉴定转化菌落的插入序列 ;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导 ,SDS -PAGE和免疫印迹分析融合蛋白的表达 ;将构建的真核重组表达质粒免疫小鼠 ,观察其诱导的抗体应答。结果　PCR扩增出gra8基因的特异片段 ,各组阳性克隆的序列正确 ,并分别被亚克隆到原核表达质粒 pGEX - 4T - 2和真核表达载体pVAX1上 ,构建了弓形虫致密颗粒抗原gra8的原核和真核重组表达质粒 ;原核表达质粒在大肠杆菌中表达了gra8的融合蛋白 ;真核重组表达质粒诱导小鼠产生了抗弓形虫抗原的抗体。结论　以pGEX - 4T - 2和 pVAX1为载体 ,分别成功构建了gra8的原核和真核重组表达质粒。