摘要：为探究捻转血矛线虫gst基因的原核表达及其生物信息学特征,以捻转血矛线虫cDNA为模板,设计特异性引物扩增gst基因,构建原核表达载体pET30a(+)-gst转化至*** BL21(DE3)感受态细胞,将鉴定正确的重组菌进行表达条件优化后,再通过SDS-PAGE分析蛋白表达的特征,并利用在线软件对gst蛋白进行生物信息学分析。结果表明:捻转血矛线虫gst基因大小为618 bp;诱导后的pET30a(+)-gst重组菌最佳诱导条件为0.05 mmol/L的IPTG在37℃时诱导6 h,以包涵体的形式存在,大小约为29 ku。生物信息学分析表明:gst分子式为C1083H1657N277O294S6,属于不含信号肽和跨膜区的亲水性蛋白;二级结构主要由α螺旋形成;潜在的抗原表位主要位于25~48、55~63、92~106、113~124、139~147、170~189和195~205位氨基酸附近。本试验成功构建gst基因原核表达系统,优化表达条件下能稳定纯化gst重组蛋白,为进一步探索捻转血矛线虫丙硫咪唑耐药机制及gst蛋白的生物学特性提供研究基础。

摘要：谷胱苷肽S-转移酶(gst)是昆虫体内广泛存在的一类解毒酶,可以保护机体免受内源性或氧化物的损害。昆虫对一些杀虫剂的抗性与gst表达水平增高有关。gst的研究主要集中在杀虫剂抗性上,可将其作为昆虫的药物靶标,设计和开发新型的杀虫剂。采用RACE的方法,克隆了葱蝇(Delia antiqua)gst基因cDNA的全长序列(GenBank登录号:JQ625502),获得的cDNA全长874bp,其中阅读框ORF 627bp,编码208个氨基酸,推测其相对分子质量为23.9kD,等电点为5.83。通过该基因推导的氨基酸序列与其它物种的gst蛋白进行相似性比较和系统发育分析,发现葱蝇与丝光绿蝇(Lucilia cuprina)的谷胱甘肽转移酶氨基酸序列同源性最高。该结果进一步丰富了gst基因的基础数据,有助于葱蝇的杀虫剂抗性机理和发育机理的相关研究。

摘要：本研究扩增肝片吸虫(Fasciola hepatica,Fh)谷胱甘肽硫转移酶(gst)基因,并进行同源性分析。根据GenBank发表的部分Fh gst基因序列设计并合成一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增出Fh gst基因完整的开放阅读框(openreading frame,ORF),测定序列,使用分子生物学软件进行同源性分析。获得Fh gst基因全长682bp,编码218个氨基酸,与澳大利亚分离的肝片吸虫gst同源性较高,与大片吸虫和卫氏并殖吸虫的gst也有较高的同源性。不同虫株gst基因具有较高的同源性,因此Fh gst蛋白不适合用作诊断抗原,但由于其存在交叉反应,gst基因作为分子疫苗的候选基因具有重要意义。肝片吸虫gst基因的克隆,为进一步研究gst蛋白的功能和作用奠定了基础。