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棉花ghpao3基因的CRISPR/Cas9表达载体的构建: 收藏
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引用; 《新疆农业科学》2019年第2期56卷 226-232页; 作者：朱雪峰田文刚熊显鹏薛飞张莉朱华国石河子大学/新疆生产建设兵团绿洲生态农业重点实验室; 【目的】研究棉花ghpao3基因的功能,通过CRISPR/Cas9技术构建棉花ghpao3基因的基因编辑载体。【方法】筛选合适的两个PAM位点设计引物,在引物中添加接头,重叠延伸PCR,将两个靶标片段连接在一起。通过限制性核酸内切酶BsaⅠ对pRGEB32-7...; 【目的】研究棉花ghpao3基因的功能,通过CRISPR/Cas9技术构建棉花ghpao3基因的基因编辑载体。【方法】筛选合适的两个PAM位点设计引物,在引物中添加接头,重叠延伸PCR,将两个靶标片段连接在一起。通过限制性核酸内切酶BsaⅠ对pRGEB32-7载体进行单酶切,使用一步法连接重叠延伸产物与线性化的pRGEB32-7载体。【结果】使用电击转化法将构建好的棉花ghpao3基因的基因编辑载体转入农杆菌LBA4404感受态,通过卡那霉素筛选阳性单克隆菌株。【结论】条带大小与预期一致,棉花ghpao3基因的基因编辑载体构建成功。; 来源：详细信息评论

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