摘要：根据GenBank中报道的绵羊ghrelin基因mRNA序列设计特异性引物,以甘肃肉用绵羊新品种选育群羔羊皱胃组织RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增出绵羊ghrelin基因并克隆到pMD18-T载体中进行测序验证.用生物信息学软件预测其结构,并构建系统进化树,探讨了绵羊ghrelin基因的生物学功能.结果表明:克隆的绵羊ghrelin基因序列共409bp,包含完整的编码区序列,含有1个351bp的完整开放阅读框,编码116个氨基酸;ghrelin蛋白分子质量为12 975.74u,理论等电点为4.70,信号肽切割点位于第23～24位氨基酸之间,整条多肽链表现为疏水性,是一种典型的跨膜脂溶性蛋白;ghrelin基因编码产物的二级结构主要以α-螺旋和无规则卷曲为主,主要位于胞外(包括细胞膜),作为一种激素参与机体胁迫应答、免疫应答和转录调控.

摘要：根据Gen Bank上的ghrelin基因序列设计1对引物,应用PCR技术直接从可乐猪肌肉组织基因组中扩增出了包含ghrelin基因全序列的特异片段,包括第一、第二外显子和第一内含子DNA序列,并进行直接测序,分析该基因与可乐猪12项肉质性状的关联性,结果表明:在ghrelin基因第一内含子上检测到1个单碱基突变:G252A,表现出纯合型GG和杂合型GA两种基因型,其中GG基因型频率高于GA基因型频率,达65.4%,等位基因G为优势等位基因,表现为低度多态。χ~2检验表明,该SNP位点处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。最小二乘分析显示,ghrelin基因252 bp位点对可乐猪的肉质性状无显著影响(P>0.05)。

摘要：[目的]为研究转生长相关基因对猪的作用。[方法]采用RT-PCR方法,从13/17罗伯逊易位杂合子猪小肠组织中提取总RNA,将其纯化后作为PCR扩增模板,参考GenBank公布的猪ghrelin的mRNA序列设计合成具有Nhe I和Hind III双酶切位点引物,扩增获得ghrelin基因cD-NA全长序列。将准确的ghrelin基因片段克隆于 pMD19-T simple Vector后进行序列分析,获得猪ghrelin基因cDNA全长基因片段。经Nhe I和Hind III双酶切,将 ghrelin基因cDNA片段连接到真核表达载体pEGFP-N1,获得真核表达载体的重组质粒pEGFP-ghrelin。重组质粒转染猪成纤维细胞,观察标记基因荧光蛋白的表达。[结果]13/17罗伯逊易位杂合子猪的ghrelin基因与已发表的序列相同,并成功获得具备猪ghrelin基因全长cDNA序列的真核表达载体pEGFP-ghrelin。[结论]构建的真核表达载体可以用于转基因猪的进一步试验,同时也为研究ghrelin的调节机制奠定基础。

摘要：提取绵羊输卵管上皮细胞总RNA,采用Primer 5.0软件设计引物,运用RT-PCR技术扩增ghrelin基因。结果显示,经测序和序列比对鉴定,该方法成功地扩增到了大小为200 bp的目的基因,表明RT-PCR技术是检测绵羊输卵管上皮细胞中ghrelin基因的有效手段,可为今后研究不同激素水平下绵羊输卵管组织中ghrelin基因的表达量变化及进一步体外试验奠定基础。