摘要：利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统构建了含有h3n8亚型马流感病毒hA、nA和M1蛋白的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)。VLPs的鉴定结果表明,3种蛋白正确组装出了类似于天然病毒粒子的形态结构,且具有血凝活性。将VLPs免疫马匹制备高免血清,分别设计小鼠先被动免疫再攻毒以及先攻毒再紧急注射免疫血清,结果证明马高免血清对h3n8亚型马流感病毒感染具有良好的预防和治疗效果,为研制h3n8亚型马流感VLP疫苗提供了理论依据。

摘要：为建立简便、快速检测h3n8亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的方法,本研究根据h3和n8亚型AIV的hA和nA基因保守序列,设计合成了2对特异性引物和2条Taq Man探针,通过优化反应条件建立了h3n8亚型AIV一步法实时荧光定量RT-PCR。结果表明:该方法敏感型好,对h3n8亚型AIV检测敏感性达100个模板拷贝数。该方法特异性强,仅对h3和n8亚型AIV检测为阳性;应用该方法对96份临床样品进行检测,结果与病毒分离鉴定结果一致。因此,本研究建立的h3n8亚型AIV一步法实时荧光定量RT-PCR检测方法具有简便、快速、敏感和特异等优点,可为h3n8亚型AIV感染的有效防控提供技术支撑。

摘要：为明确新疆南疆驴是否感染马流感病毒(Equine influenza virus,EIV)及驴源EIV hA基因特征,根据GenBank登录的EIV基因序列,设计合成1对引物,采集新疆南疆地区2个驴屠宰点33份驴肺组织样品,采用RT-PCR扩增驴源EIV hA基因片段,并对扩增产物进行测序与序列分析。结果表明,中国新疆南疆驴源EIV A/donkey/Xinjiang/1/2015(h3n8)株hA基因长1 704bp,编码567个氨基酸。同源性分析结果显示,与国内外h3n8亚型EIV参考毒株核苷酸和氨基酸同源性分别为88.9%~99.9%和88.3%~99.8%,与国内毒株和哈萨克斯坦毒株在一个进化分支内。与GenBank数据库中唯一1个驴源毒株A/donkey/Xinjiang/5/2007(h3n8)的比对结果显示,2个毒株裂解位点、糖基化位点、抗原位点和受体结合位点氨基酸完全一致,只是错位2个氨基酸。确定新疆南疆存在驴感染EIV,可能为国内疫情的延续或周边国家传入。

摘要：根据GeneBank上已发表的h3n8亚型禽流感的非结构蛋白基因(nS)序列,设计了一对特异性引物,成功地从A/mallard/SanJiang/167/2006(h3n8)中克隆到nS基因序列,该克隆基因全长860bp,编码nS1和nS2两种非结构蛋白。与其他h3n8亚型的nS基因进行了同源性比较,核苷酸同源性为65.5%～98.3%,推导的氨基酸序列同源性为65.4%～97.8%。nS基因遗传进化树形成两个分支,该分离株处于等位基因B组。另外,此毒株nS基因在263～277位没有发生15个碱基的缺失。A/mallard/SanJiang/167/2006(h3n8)株149位为丙氨酸,其不能感染哺乳动物。

摘要：根据已知禽流感病毒(AIV)的8个基因序列设计合成12对特异引物,通过反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,分别成功扩增出分离于野鸭(Mallard)的1株h3n8亚型禽流感病毒的全基因片段,将其分别克隆到pMD18-T载体后进行序列测定。同时将8个基因片段与GenBank发表的相应序列进行比较,绘制各基因的进化树。结果表明:所克隆到的8个片段均包含相应病毒基因的完整开放阅读框架,长度分别为PB2/2280、PB1/2276、PA/2150、hA/1734、nP/1497、nA/1413、MP/759、nS/838bp核苷酸,分别编码759、758、716、577、498、4702、52/962、30/125个氨基酸。A/mallard/Sanjiang/359/2007(h3n8)株hA有7个潜在糖基化位点;在hA裂解位点序列为PEKQTR↓GLF,无连续的多个碱性氨基酸插入,具有典型的低致病性禽流感病毒特征。根据A/mal-lard/Sanjiang/359/2007(h3n8)株与参考毒株的序列比较分析结果推测,该分离株可能是不同亚型禽流感病毒通过互相基因交换所形成的基因重组体。

摘要：【目的】明确新疆南疆驴是否感染EIV，及EIV nA基因特征。【方法】根据GenBank登录的EIV基因序列，设计合成1对引物，针对新疆南疆地区2个驴屠宰点33份驴肺进行EIV nA基因RT-PCR扩增、电泳分析、胶回收、测序及序列分析。【结果】中国新疆南疆驴源EIV A/donkey/Xinjiang/1/2015（h3n8）株nA基因长1 413 bp，编码470个氨基酸。与国内外h3n8亚型EIV参考毒株核苷酸同源性为752%~996%，与国内外参考毒株氨基酸同源性为80%~100%，与国内毒株、哈萨克斯坦毒株和印度毒株在一个进化分支内。与GenBank数据库中唯一一个驴源毒株A/donkey/Xinjiang/5/2007（h3n8）糖基化位点个数和分布位置完全一致。【结论】新疆南疆存在驴感染EIV，可能为国内疫情的延续或周边国家传入。

摘要：通过比对nCBI上马流感h3n8序列,针对hA和nA基因序列高度保守区域设计了特异性强的引物与探针,优化了程序,建立了以实时荧光RT-PCR技术检测马流感h3n8的方法。结果表明,该方法最小检测浓度为3.36×10^2copies/μL;特异性强,仅针对马流感h3n8样本检出为阳性;对58份临床样本的检测,阳性检出率为12.07%,是常规PCR的2.3倍,且与病毒分离100%符合。