摘要：2008年从湖北省分离到1株h3n8亚型马流感病毒A/equine/hubei/6/08。以2002年美国KEnTUKY株为模板设计hA基因测序引物,进行RT-PCR,然后测定该分离株的hA基因核苷酸序列。经nCBI上Blast同源性比较发现,与A/equine/newmarket/5/2003(h3n8)同源性较高为98.7%。hA蛋白遗传进化分析表明该毒株隶属于h3n8亚型马流感病毒中的美洲系福罗里达亚系。该株与OIE现在推荐的疫苗候选株A/equine/Kentuck-y/5/2002(h3n8)hA1蛋白氨基酸序列比对发现有3处氨基酸替换位点;与OIE以往推荐的疫苗候选株A/e-quine/Kentucky/1/1994(h3n8)比对发现有11处氨基酸替换位点。研究结果表明该分离株可作为中国研制马流感疫苗的候选株。

摘要：为建立马流感病毒(EIV)的检测方法,本试验针对h3n8亚型EIV血凝素(hA)基因高度保守序列设计并合成了2对引物和1条TaqMan荧光探针,建立了TaqMan荧光定量PCR方法。经用TaqMan荧光定量PCR、RT-PCR和病毒分离方法分别检测新疆等省135份疑似EIV马鼻拭子样品,其结果表明:3种方法的马流感检出率分别为54.07%、37.78%、0.89%;TaqMan荧光定量PCR可检出马流感病毒基因组RnA的灵敏度可达10拷贝/反应,而且与其他马呼吸道病毒均无交叉反应,具有良好的特异性、敏感性和重复性。该方法为h3n8亚型马流感的早期诊断及分子流行病学调查等提供了一种新的快速、准确的定量检测技术。

摘要：为了特异性地检测h3n8亚型马流感病毒,试验根据h3n8亚型马流感病毒(EIV)hA基因特异保守序列设计1对引物,建立了检测h3n8亚型EIV的Eva Green实时荧光定量PCR方法,并对该方法进行评价。结果表明:该方法能特异性地扩增h3n8亚型EIV,而对h7n7亚型EIV、马传染性贫血病毒、马动脉炎病毒、马疱疹病毒均无特异性反应;最低检测限度能达到10拷贝/μL;并且该方法具有良好的重复性。说明Eva Green这种新型荧光染料可以敏感有效地检测EIV,可用于马流感的诊断。