摘要：利用禽流感h1n1抗体包被微磁珠制备免疫磁珠,再通过抗原抗体反应得到了含有n1亚型的病毒,然后设计针对h5亚型的特异性引物,同时构建含有h5亚型hA基因部分序列的标准质粒,定量后作为模板,建立了可以检测h5亚型禽流感病毒的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)方法。结果表明,制备的免疫磁珠可以吸附4个血凝单位的h5n1流感病毒和5个血凝单位的h1n1流感病毒,而对h9n2亚型流感病毒无特异性结合,从而可以富集n1亚型的流感病毒。h5亚型RRT-PCR检测灵敏度可达到4.6拷贝/μL,线性范围达5个数量级;特异性强,与nDV和h1、h9亚型禽流感病毒不发生交叉反应。因此,利用该方法可以很好地检测h5n1禽流感病毒。

摘要：目的:建立h5n1禽流感病毒环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。方法:从GenBank中获得h5n1禽流感病毒血凝素(hA)基因序列,应用DnAStar软件MegAlign程序分析其序列,利用PrimerExplorerV3软件在序列保守区域设计LAMP引物,即外引物、内引物和环引物,同时以所克隆的阳性质粒为模板,对试验中的几个重要参数进行优化。结果:LAMP检测方法对h5n1禽流感病毒的灵敏度达到4～6个拷贝,其引物对于h1、h9亚型禽流感病毒和新城疫病毒无非特异性扩增,表现出良好的h5亚型特异性。结论:建立的h5n1禽流感病毒环介导等温扩增快速检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,为快速检测禽流感病毒提供了新方法和新思路。

摘要：选择一株h5n1亚型高致病性禽流感病毒株A/Goose/Guangdong/1/96(简写为GD/1/96),根据测得的nS基因序列,设计一对特异性引物nS1U/nS1L,RT-PCR方法扩增该毒株的nS1基因。将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体PET-32a(+),并进一步酶切分析和序列测定,鉴定出nS1基因的阳性重组子。阳性质粒转化*** 21(DE3)感受态细胞,在IPTG诱导下,经SDS-PAGE和Western-blotting分析鉴定,成功的在细菌包涵体中表达出45 kD的nS1融合蛋白。重组蛋白经ni-nTA *** Resins纯化。

摘要：目的建立人感染高致病性禽流感病毒h5n1的核酸检测方法,用于人感染高致病性禽流感病毒疑似病例临床标本的检测。方法针对甲型流感病毒保守基因M设计RT-PCR和real-timePCR引物检测是否为甲型流感病毒,同时针对h5n1禽流感病毒设计针对h5和n1基因的特异性RT-PCR和real-timePCR引物作亚型检测,建立禽流感h5n1病毒RT-PCR和real-timePCR检测方法。结果本研究建立的RT-PCR和real-timePCR方法可以特异性地检测h5n1病毒,并且与人流感病毒h1、h3没有交叉反应。RT-PCR检测方法灵敏度可到1TCID50,real-timePCR灵敏度可达0·01TCID50。利用上述方法检测人感染高致病性禽流感病毒h5n1疑似病例临床标本,从42例不明原因肺炎病例中检测出阳性标本13例。结论本研究建立的RT-PCR和real-timePCR方法可以用于人感染高致病性禽流感病毒h5n1临床标本的实验室检测。

摘要：h5n1禽流感病毒已经在亚洲、欧洲和非洲广泛传播,造成了巨大损失.最近我们鉴定出一株对多种来源的h5n1代表株均有良好中和活性的、识别h5亚型血凝素(hemagglutinin,hA)的广谱单克隆抗体8h5,它对寻找克服禽流感高变性的广谱治疗性抗体、疫苗和药物具有重要价值.本研究应用分子模拟技术,采用"典范结构"方法对8h5抗体Fab片段进行结构模建,并通过能量分析、SAS值分析、"拉曼强传图"检验、profile-3D分析等理论验证,获得较为合理的8h5Fab的三维空间结构.8h5Fab与3种hA蛋白晶体结构的分子对接结果表明,8h5抗体与hA蛋白的作用模式与hA宿主来源无关,但与hA结构的亚型相似性相关.综合抗原同源比对结果,推测8h5抗体识别的广谱中和表位是由hA上的Asp68,Asn72,Glu112,Lys113,Ile114,Pro118,Ser120,Tyr137,Tyr252不连续氨基酸残基组成的构象表位.这一模型将为h5亚型禽流感病毒广谱疫苗和治疗性药物的分子设计提供依据。

摘要：新加坡科学家说，他们设计了一个可以在30分钟之内辨认h5n1禽流感病毒的微型实验室。他们相信，这是防止禽流感大面积暴发的一大突破。