摘要：世界卫生组织报道2013年在中国出现首例人感染h7n9流感病毒病例,这在我国一定的范围内造成了危害,引起了恐慌,因此利用生物信息技术对其进行研究显得十分必要。神经氨酸酶nA是流感病毒最重要的抗原之一,也是抗流感药物的重要作用靶点。从美国国家生物技术信息中心(national Center for Biotechnology Information,nCBI)数据库下载A/h7n9流感病毒nA基因核酸序列及其编码蛋白序列,利用MEGA5.0软件对核苷酸编码序列构建系统进化树,利用BioEdit软件进行比对,分别作核苷酸与氨基酸同源性计算,继而分析nA基因重要位点变异情况,结果显示h7n9流感病毒传播呈现一定的地域关系和时间关系,2013年流行的中国的毒株属于亚欧型,其nA茎区发生了比较明显的变异,这也许是该病毒感染人类的原因之一。这些分析结果对于研究h7n9流感病毒基因的进化关系和变异趋向具有重要的参考价值。

摘要：根据h 7n 9亚型禽流感病毒(AIV)的hA和nA基因保守区域,分别设计了2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了基于高分辨率熔解曲线(hRM)分析的h7n9亚型AIV检测方法。结果显示,该方法特异性强,其他常见禽源病毒及非h7亚型和非n9亚型的AIV不能形成特异熔解峰形;灵敏度高,对h7和n9阳性质粒的最低检测限分别达到1.0×101 copies/L和1.0×100 copies/L;重复性好,熔解峰Tm 1和Tm2的批内和批间变异系数均<1%;临床样本检测与某商品化h7n9亚型AIV定量PCR检测试剂盒比较,符合率为100%。该方法可用于临床疑似病例的应急检测、早期诊断及养鸡场、活禽交易市场等外环境h7n9亚型AIV的监测。

摘要：目的建立检测人感染新型甲型禽流感h7n9病毒的四重荧光定量RT-PCR方法。方法以人细胞RnA酶P(Rnase P)基因为内参,用Primer Express3.0软件设计PCR特异性引物和探针。通过不同来源的呼吸道病毒进行特异性分析,构建质粒标准品用于分析该方法的灵敏度和重复性,并对1 896例临床标本进行回顾性检测。结果该方法检测甲型流感病毒(Flu A)、h7、n9与Rnase P灵敏度均达102copies/m L,特异性达100%,每对引物和探针只检测出相应的病毒,无交叉反应,检测变异系数(CV)均低于1.55%。用该法检测1 896例临床标本,结果 Flu A 235例,h7n9 127例,与其他试剂报告结果完全一致。结论建立的四重荧光定量RT-PCR法可快速检测h7n9病毒,灵敏度与特异性好,可用于h7n9病毒感染患者的早期诊断。

摘要：根据h7n9亚型禽流感病毒(AIV)hA基因和nA基因的保守序列,分别设计特异性引物和不同荧光基团标记的TaqMan探针。通过优化反应条件,建立了h7n9亚型AIV的双重实时荧光定量RTPCR检测方法。结果显示,该法检测h7n9亚型AIV的下限为102copies/μL,批内重复和批间重复变异系数均小于3%。本研究建立的h7n9亚型AIV双重实时荧光定量RT-PCR方法,具有快速、特异和敏感的优点,可为h7n9亚型AIV的有效防控提供技术支撑。

摘要：目的:通过哺乳动物细胞表达出禽源h7n9流感表面hA蛋白,并鉴定其抗原性。方法:通过引物设计,利用融合PCR方法扩增得到h7n9禽流感hA基因,以p CAGGS为表达载体构建重组质粒p CAGGS-h7-thrombin。测序正确后将重组质粒转染293T细胞。经72 h后收获上清,通过镍柱和凝胶层析柱纯化后得到目的蛋白。Western blot和ELISA结果鉴定纯化的h7蛋白的抗原性。结果:293T细胞表达的上清经hisTrapTMhP纯化后过Superdex 200 10/300 GL分子筛,在洗脱体积达到11 m L左右出峰,由出峰位置判断其为h7三聚体。Western blot检测在60 ku左右有一条阳性条带,ELISA检测其对抗h7n9小鼠阳性血清有很高的反应值。试验成功表达禽流感病毒h7n9的h7蛋白,并且针对h7n9的阳性血清有较高的灵敏性,为进一步研究h7n9亚单位疫苗奠定了基础。

摘要：2017年初在中国出现的h7n9流感病毒变异株表现出对禽高致病性的特征,根据高致病性h7n9流感病毒(hP-h7n9)的hA基因序列,设计1组hP-h7n9特异性的引物和探针,在对反应体系进行优化的基础上,建立了hP-h7n9的荧光RT-PCR检测方法并进行了特异性、敏感性和重复性试验,制作了标准曲线。结果显示,本方法只对hP-h7n9特异性扩增,而对低致病性h7n9病毒(LP-h7n9)、h7n3流感病毒(h7n3)、h3n2流感病毒(h3n2)、h5n1禽流感病毒(h5n1)、h9亚型禽流感病毒(h9)、新城疫病毒(nDV)、甲型h1n1流感病毒(h1n1)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)等病原未见扩增。该方法最低能够检测到35.45 copies的阳性质粒,具有良好的检测灵敏度。本方法的建立将为hP-h7n9的诊断、监测和防控提供快速、特异、敏感的技术手段。

摘要：目的建立一种快速准确诊断禽流感病毒 h7n9型的实时荧光定量 RT-PCR检测方法。方法参照国家生物技术信息中心（nCBI）公布的 h7n9基因 hA序列，设计特异性引物及TaqMan探针；构建阳性重组质粒，验证其最低检测拷贝数、重复性及特异度。结果试验构建的阳性重组质粒，线性关系在6＆#215;102 copies／μl～6＆#215;108 copies／μl范围内检测结果良好；用该方法测得最低拷贝数为600 copies／μl，特异度和重复性（CV＜1％）良好，无交叉反应；用该荧光定量 RT-PCR检测方法检测8份阳性样品和8份阴性样品，准确率为100％（16／16）。结论实验建立的实时荧光定量 RT-PCR检测方法可用于禽流感病毒 h7n9型的快速检测。

摘要：目的建立h7n9禽流感病毒环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。方法从GISAID数据库中获得h7n9禽流感病毒血凝素(hA)和神经氨酸酶(nA)基因序列,应用DnAStar软件MegAlign程序分析其序列,利用PrimerExplorer V4软件在序列保守区域设计LAMP引物,即外引物、内引物,同时以所克隆的阳性质粒为模板,建立h7n9禽流感病毒等温扩增快速检测方法。结果LAMP检测方法对h7n9禽流感病毒的灵敏度达到10个拷贝,所用引物对于h1、h3、h5亚型禽流感病毒和新城疫病毒无非特异性扩增,表现出良好特异性。结论建立的h7n9禽流感病毒等温扩增快速检测方法灵敏度高、特异性强,为快速检测禽流感病毒提供了新方法。

摘要：目的建立一套能够同时检测禽流感病毒h7n9经典毒株和新型变异毒株的多重荧光定量PCR方法。方法以禽流感病毒h7n9亚型hA保守基因、hA裂解位点和nA基因为检测靶标,设计特异性引物和探针,建立三重荧光PCR检测方法,并对该方法进行特异性和敏感性验证。结果参考GenBank收录毒株序列设计引物;探针分别选用ROX、FAM、VIC为荧光基团;阈值设定原则以阈值线刚好超过阴性对照检测荧光曲线的最高点;试剂盒特异性好不受其他亚型流感病毒以及常见禽类病毒的干扰;灵敏度可以达到100~101个EID50。结论该研究建立的荧光PCR检测方法敏感特异,能够用于禽流感病毒h7n9毒株检测。

摘要：目的探讨表格式病情交班表在h7n9患者交接班中的应用效果。方法设计表格式病情交班表,将该表应用于h7n9隔离病房中,并比较该表使用前后的护士完成报告时间、护理质量及护士满意度。结果使用表格式病情交班表交班后,护士完成交班报告时间、护理质量及满意度均较使用前明显改善(P<0.05)。结论使用表格式病情交班表交班是一种快速、简洁、有效、直观的新型交班方式,有助于护士有效地完成交班,有利于提高护理工作的效率,减少不良事件的发生,从而提升护理质量,值得推广应用。