摘要：参考GenBank上发表的H5亚型禽流感(AIV)血凝素(ha)基因序列及鸡白细胞介素18成熟蛋白(mChIL-18)的cDNA基因序列,分别设计了ha1和mChIL-18基因的2对引物。然后分别以pMD18-T-ha质粒和pGEX-mChIL-18质粒为模板,扩增出了H5亚型AIV的ha1基因和mChIL-18的cDNA片段。再以杆状病毒pFast-BacTMdual为载体,将H5亚型AIV ha中的ha1基因和mChIL-18基因分别插入到双表达载体pFastBacTMdu-al的p10启动子(PP10)和多角体蛋白启动子(PPH)的下游,构建携带ha1基因和mChIL-18基因的重组pFastBacTMdual-ha1-mChIL-18真核表达质粒。最后将构建的真核表达质粒转座入大肠杆菌DH10Bac,并利用昆虫细胞进行转染。这个重组载体的构建为考察mChIL-18作为免疫增强剂的作用及下一步AIV疫苗的研究奠定了坚实的基础。

摘要：根据已报道的禽流感病毒H5亚型ha1基因设计1对引物,利用RT-PCR技术扩增目的基因片段,将扩增片段插入到pPROEX-HTb表达载体上,并对重组表达质粒进行PCR酶切鉴定,通过序列测定验证读码框,并在大肠埃希氏菌BL21(DE3)中进行表达.结果表明:扩增出的1 000bp的基因片段在大肠埃希氏菌中成功表达,蛋白产物约为38ku,经Western-blotting分析表明该融合蛋白具有很好的免疫原性.

摘要：参考GenBank上发表的H5亚型禽流感(AIV)血凝素(ha)基因序列及鸡白细胞介素18成熟蛋白(mChIL-18)的cDNA基因序列,分别设计了ha1和mChIL-18的cDNA的2对引物。然后以pMD18-T-ha质粒和pGEX-mChIL-18质粒为模板,扩增出了H5亚型AIV的ha1基因和mChIL-18的cDNA片段。再以杆状病毒pFastBacTM dual为载体,将H5亚型AIV ha中的ha1基因和mChIL-18基因分别插入到双表达载体pFastBacTM dual的p10启动子(PP10)和多角体蛋白启动子(PPH)的下游,构建携带ha1基因和mChIL-18基因的重组pFastBacTM dualH-A1-mChIL-18真核表达质粒。最后将构建的真核表达质粒转座入大肠杆菌DH10Bac,为下一步进行昆虫细胞的转染奠定了基础。这个重组载体的构建为考察mChIL-18作为免疫增强剂的作用及下一步AIV疫苗的研究奠定了坚实的基础。