摘要：为建立H9N2亚型禽流感病毒(AIV)抗体快速、高效的血清学检测方法,参考GenBank数据库中H9N2 AIV的ha基因序列(登录号:MK995886.1)设计并合成特异性引物,以H9N2 AIV RNA为模板,RT-PCR扩增目的基因ha1,构建pET28a-ha1重组质粒,经原核系统表达获得ha1蛋白。通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定蛋白表达和反应原性,用纯化后的ha1重组蛋白作为包被抗原建立间接ELISA方法。结果显示,该检测方法抗原最佳包被浓度为0.2μg/mL,血清最佳稀释度为1∶160,用1%BSA溶液37℃封闭60 min效果最佳,酶标二抗最佳稀释度为1∶6 000,具有较高的特异性、灵敏性和符合率。上述结果表明,本试验成功表达并纯化了H9N2 AIV的ha1蛋白,建立的间接ELISA检测方法为H9N2 AIV的流行病学调查、免疫效果评价及临床诊断试剂盒的开发奠定了基础。