摘要：目的构建pEGFp-N1-hbsag-p30-rop2重组表达载体并进行293T细胞的转染表达。方法根据pcDNA3-hbsag-p30-rop2重组质粒设计引物,进行pCR扩增,获得hbsag-p30-rop2融合基因并进行酶切,酶切片段与pEGFp-N1载体连接,构建pEGFp-N1-hbsag-p30-rop2真核表达载体,酶切和测序鉴定后转染293T细胞,采用荧光、Western blot和ELISA检测其蛋白表达效率;分别用p30单抗腹水、rop2鼠源多抗、乙肝患者血清进行ELISA,检测融合蛋白的免疫反应性。结果 pCR扩增hbsag-p30-rop2基因片段约2 600bp,与理论值相符。构建的重组质粒pEGFp-N1-hbsag-p30-rop2经双酶切获到约4 700bp和约2 600bp的两条片段,与预期相符。对重组载体测序,hbsag基因的252位C→A,345位T→C,rop2基因的695位A→T,且3个碱基突变均为同义突变。免疫荧光法检测pEGFp-N1-hbsag-p30-rop2转染成功并正确表达,细胞蛋白浓度2.40mg/ml。提取的融合蛋白能被弓形虫p30单抗腹水、rop2鼠源多抗和乙肝患者血清识别。结论成功构建pEGFp-N1-hbsag-p30-rop2重组表达载体,并在293T细胞中过表达,表达蛋白具有免疫反应性,为乙肝和弓形虫联合疫苗的研制奠定了基础。