摘要：本文基于Hill动力学与Michaelis-Menten方程,建立理论模型研究乙型肝炎病毒(hbx)通过与环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)相互作用促进肝癌(HCC)发生发展的一种物理机制.理论模型考虑hbx-CPAP(中心体P4.1相关蛋白)-AKT(蛋白激酶B)-GSK3(糖原合成酶激酶3)-P53通路信号传导特性.研究发现,CREB对hbx有扩增效应,较高浓度的CREB使得P53抑癌功能下降,并促使炎性因子(NF-κB)呈现出二次增长,为hbx诱发HCC提供了炎性微环境.CREB还会调控AKT呈现二次增长,影响细胞糖原代谢,在一定程度上促使了HCC的发生发展.理论结果符合实验,进一步揭示了hbx通过与CREB相互作用促进HCC发生发展的一种物理机制,可为设计阻断肝炎向肝癌转变通路的治疗方案提供理论依据.

摘要：目的建立稳定、高效的hbx、羧基末端截短的中分子表面蛋白(MHBst)体外表达细胞株,以进一步研究hbx、MHBst蛋白在肝癌发生中的作用及其机理。方法设计特异性引物,采用PCR方法从adr亚型HBV质粒pHBV DNA中扩增hbx、羧基末端截短至155位氨基酸的中分子表面蛋白(MHBst155)编码基因,并定向插入绿色荧光蛋白(GFP)表达载体pEGFP-C1的BglⅡ、KpnⅠ和BglⅡ、BamHⅠ酶切位点,转化宿主菌DH5α,提取质粒,分别用上述内切酶酶切及DNA测序鉴定重组质粒。采用脂质体介导将空载体、重组质粒分别转染到人肝肿瘤细胞株HepG2中,G418筛选抗性细胞克隆,荧光显微镜下观察GFP表达,挑取表达GFP的抗性克隆扩大培养、传代。采用RT-PCR、蛋白印迹检测抗性细胞中hbx、MHBst155的mRNA及蛋白水平。结果经酶切及测序鉴定成功构建了pGFP-hbx、pGFP-MHBst155重组表达载体,将空载体及重组质粒转染HepG2,经G418筛选约20 d获得抗性细胞克隆。将带有绿色荧光的抗性克隆扩大培养并经传代40次,细胞仍表达强的绿色荧光。RT-PCR及蛋白印迹检测表明转染重组体的HepG2/GFP-hbx、HepG2/GFP-MHBst155细胞有相应的条带,而空载体、空白对照组未出现条带。结论成功构建了hbx、MHBst155真核重组表达载体pGFP-hbx、pGFP-MHBst155,获得了稳定表达融合蛋白GFP-hbx、GFP-MHBst155的HepG2细胞系,为进一步研究hbx及MHBst蛋白在肝癌发生中的作用及分子机制构建了良好的平台。

摘要：目的通过检测肝细胞肿瘤（ＨＣＣ）患者癌组织中ＨＢｘ基因探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）在 ＨＣＣ中的重要性。方法根据ＨＢｘ基因ＤＮＡ序列设计引物，采用特异性聚合酶链式反应（ＰＣＲ） 对３１例病理确诊并经手术切除后的ＨＣＣ患者癌组织进行了检测，同时采用ＰＣＲ方法检测了同一 患者血清ＨＢＶ ＤＮＡ。结果ＰＣＲ显示３１例ＨＣＣ患者癌组织中ＨＢｘ基因和血清中ＨＢＶ ＤＮＡ 的阳性率分别为７７．４％（２４／３１）和３２．３％（１０／３１）。结论ＨＢｘ基因片段广泛存在于ＨＣＣ患者癌 组织中并且在癌细胞中可能存在整合。

摘要：目的:构建靶向乙肝病毒X基因(hbx)的shRNA表达载体pSilencer3.1-shhbx,并应用其体外抑制hbx促HepG2细胞凋亡的作用。方法:设计并构建靶向hbx的shRNA表达载体pSilencer3.1-shhbx,脂质体转染法将hbx表达载体pcDNA3.1-hbx与pSilencer3.1-shhbx共转染人肝癌HepG2细胞,培养72小时后,分别以RT-PCR、Western blot和免疫荧光检测hbx的表达量。Annexin V-FITC/PI双染经流式细胞仪检测细胞的凋亡变化。结果:重组质粒pSilencer3.1-shhbx酶切鉴定和测序结果均与设计的一致。该质粒使hbx基因mRNA表达量降低了47.1%,进而使hbx蛋白表达量降低了58.9%,hbx蛋白荧光强度减弱,并使hbx诱导的HepG2细胞凋亡率降低了52.11%。而阴性对照质粒无此作用。结论:成功构建靶向hbxshRNA表达载体pSilencer3.1-shhbx,并可应用其抑制hbx促HepG2细胞凋亡的作用。