摘要：以hcv cDNA为模板,设计特异性扩增引物,PCR得到编码NS5B的基因,与PET-21a质粒连接,构建重组质粒。重组质粒转化入大肠杆菌Rosetta菌株,加入IPTG(终浓度0.5 mmol/L),30℃、5 h诱导表达。连续通过Ni-NTA柱、SP阳离子交换柱纯化蛋白,1 L菌液可得到1.2 mg蛋白。体外活性测定结果表明,所得蛋白具有RdRp功能,酶对底物UTP的Km值为2.06μmol/L。

摘要：普遍认为引起肆虐全球的HIV/AIDS大流行的病原体HIV是不可治愈并且是致命的。自从 20多年前发现并分离出病毒后,全世界在生产预防性和治疗性疫苗的努力至今都是失败的。作者在尼日利亚设计开发了HIV疫苗,并且已经应用这些疫苗分别对知情同意的HIV感染者和正常人进行了试验。在许多病例中,治疗性疫苗不仅在HIV感染的症状上产生了快速的改善,而且许多患者持续的抗 HIV抗体血清转阴。在那些并发HBV和 /或hcv感染的HIV患者中,治疗性疫苗产生了持续的抗HBsAg和抗hcv抗体转阴。使用这些疫苗至今没有观察到显著的不良反应,也没有引起可检测的标志性抗 HIV抗体产生。推测这种疫苗可诱导针对HIV、HBV和hcv感染细胞有效的选择性的细胞介导的细胞毒性免疫应答。

摘要：全球范围内约有1.7亿人感染丙肝病毒,至今仍无法治愈。在过去的30年中,利巴韦林和α干扰素是仅有的有效治疗药物。但两者效果并不明显,而且有大量副作用。因此,研发新的药物对于丙肝的治疗非常的迫切。通过基于分子结构的药物设计与高效筛选技术,以及免疫疗法的研究进展,已有若干药物可有效的治疗丙肝。本文阐述了在若干年内极有可能用于临床治疗,或已在临床试验中有不错进展的小分子抑制剂以及免疫疗法药物。

摘要：目的:用荧光PCR（Fluorescence　PCR,F-PCR）方法研制丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus,hcv）RNA检测试剂盒,通过临床验证,考核其性能,并与免疫学方法比较。方法:F-PCR是PCR和荧光探针杂交技术结合所产生的PCR方法。由于采用完全闭管荧光检测,避免了PCR后处理导致的假阳性污染;又采用了荧光检测技术,可以提高检测的灵敏度。结果:设计合成了HLV F-PCR诊断试剂盒。检测了 512份临床血清标本,以美国 Abbott公司的hcv ELISA诊断试剂盒和美国Biotronics公司的hcv荧光RT-PCR诊断试剂盒（B-PCR）为对照。阳性率30.5％,灵敏度97.3％,特异性98.1％。结论:F-PC的灵敏度显著优于ELISA,也高于B-PCR;三者的特异性无统计学差异。F-PCR试剂盒可以检测hcv的真实感染情况,对于临床诊断和疗效考察有一定的指导意义。

摘要：目的 研制一种新型基于膜显色的芯片,用于丙型肝炎病毒(hcv)及其基因分型的快速检测。方法 根据hcv 5′端非编码区(5′NCR)设计特异型探针和引物,制作DNA芯片。实验组为60份hcvRNA阳性血清,对照组为20份健康人血清。获得目的片段后与芯片杂交,通过尼龙膜上的显色信息判读基因型。同时以测序法进行双盲hcv基因分型对照检测。 结果 实验组hcv芯片检测结果均为阳性,对照组均为阴性。实验组基因分型检测结果与测序结果两者符合率为96.7％。 结论 用DNA芯片来检测hcv基因分型具有快速、高特异性和高灵敏度的特性,可以应用于hcv及其基因分型临床检测。

摘要：新药创制是复杂的智力活动,涉及科学研究、技术创造、产品开发和医疗效果等多维科技活动。每个药物都有自身的研发轨迹,而构建化学结构是最重要的环节,因为它涵盖了药效、药代、安全性和生物药剂学等性质。本栏目以药物化学视角,对有代表性的药物的成功构建,加以剖析和解读。特拉匹韦与波西匹韦(本刊2014,7:1084-1088)均为hcv治疗药,作用靶标相同,结构类型也相似。FDA批准二者上市相差7天,说明是独立研发的。虽然都是以酶的裂解产物多肽为起始物,但研发的策略和路径不同,所以两个"匹韦"的结构不同,体现了新药研究有鲜明的个性和不可复制性。由十肽演化成本品的成药过程,包含了降低分子尺寸、剪除肽的性质、引入和优化亲电性基团、各个结合位点的最佳配置等,是采用药物化学的原理和构效关系分析方法,辅以复合物晶体结构指导微观结构的调整而实现的。从另一视角看,本品是从肽结构出发,设计有机小分子以抑制蛋白-蛋白相互作用的分子操作。

摘要：目的　探讨建立一种更简便 ,更特异灵敏的逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)单管法。方法　采用蜡隔将RT和PCR扩增 2个独立的反应体系在 1个Eppendoff(Ep)管中分隔开来 ,设计内外引物 ,优化反应体系及条件 ,使整个检测反应经高温启动继而连续封闭地完成。结果　在 6 0例血透析患者血清中 ,33例 (5 5 % )抗 hcv IgG阳性和 2 7例抗 hcv IgG阴性血清用单管RT PCR分别检出 2 8例 (85 % )和 3例 (9% )hcvRNA阳性 ,并对 3份阳性PCR产物作核酸序列测定。本方法的检测灵敏度为 10 2 拷贝 /ml。结论　RT PCR单管法在保持高灵敏度的前提下 ,提高了特异性 ,具有简单高效 。

摘要：目的　研制丙型肝炎病毒 (hcv)基因分型的寡核苷酸探针芯片 ,并用此方法对 76例hcvRNA阳性的肝炎患者进行检测。方法　根据hcv 5′ 非编码区和核心抗原区序列设计聚合酶链反应 (PCR)引物和寡核苷酸探针 ,探针经一定修饰后固定到尼龙膜上 ,即成为hcv基因芯片。采用PCR参入法标记地高辛分子 ,其中 6份标本PCR产物同时进行测序分析。结果　此芯片可分析hcv 11个基因型的 15种亚型。 76例hcv肝炎患者芯片杂交结果均阳性 ,而 2 0名健康对照血清均阴性。 76例患者阳性标本的分型结果 :1b型 6 4例 ,2a型 11例 ,3a型 1例 ,未见混合型感染。 6份标本的序列分析表明 ,芯片杂交和测序的分型结果完全一致。结论　此芯片可初步用于检测血清hcvRNA ,并对hcv基因 (亚 )

摘要：目的　研究丙型肝炎病毒非结构蛋白 5A(hcvNS5A)对肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导HepG2细胞凋亡的抑制作用。方法　设计hcv 1bNS5A区基因片段的特异引物 ,以逆转录巢式PCR方法扩增NS5A基因片段 ,并将其进行TA克隆 ,对阳性克隆进行酶切与序列鉴定 ;构建NS5A基因表达载体 ;通过Lipofectamine基因转染法 ,将NS5A区基因导入HepG2细胞 ,加入TNFα培养 4 8h ;应用Westernblot检测caspase 3被切割、细胞色素C释放的情况以及通过AnnecxinV FITC染色两种方法 ,观察NS5A蛋白对TNFα诱导的HepG2细胞凋亡的抑制效应。结果　成功建立hcvNS5A蛋白真核表达转基因细胞模型 ,发现该蛋白对TNFα所诱导HepG2细胞凋亡有抑制作用。结论　hcvNS5A蛋白可以抑制TNFα诱导的HepG2细胞凋亡。

摘要：在同一反应体系中同时快速检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）和丙型肝炎病毒（ＨＣＶ），探讨多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）在临床中的应用价值。方法自行设计了ＨＢＶ和ＨＣＶ各一对引物，应用多重ＰＣＲ对临床标本进行检测。结果５例ＨＢｓＡｇ和ＨＣＶ抗体均阳性者，其ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ均阳性；２０例单ＨＢｓＡｇ阳性标本，１１例单ＨＢＶＤＮＡ阳性，５例ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ均阳性；２０份单ＨＣＶ抗体阳性者，ＨＣＶＲＮＡ均阳性，３例合并ＨＢＶＤＮＡ阳性；１０例慢性非甲非乙型肝炎（ＮＡＮＢ）抗ＨＣＶ阴性肝炎标本８份ＨＣＶＲＮＡ阳性，１例ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ阳性。结论多重ＰＣＲ一次反应即可完成多次常规ＰＣＲ检测，是一种值得临床应用的方法。