摘要：根据发表的鹅副粘病毒SF0 2株全基因组序列 ,分别设计合成一对引物和二对引物 ,分别采用RT_PCR方法和RT_套式PCR扩增出与预期设计大小相符的F基因和hn基因特异性条带。将扩增出的DNA片段克隆到pMD18_T载体中 ,转化TGI感受态细胞 ,经AMP/IPTG/X_Gal平板筛选 ,酶切鉴定 ,获得阳性重组质粒。对重组质粒进行序列测定 ,结果表明 :鹅副粘病毒JS/ 1/ 97/Go株F基因全长 16 6 2bp ,编码 5 5 3个氨基酸残基 ;F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为112 R_R_Q_K_R_F117,与NDV的强毒株特征相符。hn基因全长 1716bp ,编码 5 71个氨基酸残基。将F基因插入到原核表达质粒pGEX_6P_1的EcoRⅠ、XhoI多克隆位点之间 ,转化到TGI感受态细胞中 ,获得了表达F基因的阳性亚克隆重组质粒 ;将hn堪因插入原核表达质粒pProEXHTb的XBaⅠ、XhoⅠ多克隆位点之间 ,转化到TGI感受态细胞中 。

摘要：参考GenBank中牛副流感病毒3型(BPIV3)内蒙古09株(NM09)全基因组序列(GenBank登录号:JQ063064),设计了1对特异性引物以扩增山羊源副流感病毒3型(PIV3)JS2013株hn基因部分序列;将扩增到的基因测序后进行同源性分析。同源性分析结果表明,它与已报道的HPIV3、BPIV3 hn基因的序列同源性最高,分别为74.3%、79.8%。进化树分析表明,JS2013株并不属于HPIV3与BPIV3,形成一个独立的分支。将hn基因片段克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得原核重组质粒pET-32a(+)-hn。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态菌株中,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE与Western-blot试验分析表明,重组蛋白诱导表达成功,并以包涵体形式存在,大小为46ku。经Western-blot试验验证,重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备的超免疫血清能够与重组蛋白反应;把病毒接种给MDBK细胞后,间接免疫荧光试验表明重组蛋白的多克隆抗体与病毒产生特异性荧光反应,表明该重组蛋白具有很好的免疫原性和反应原性。本试验结果为山羊源副流感病毒3型感染诊断方法的建立和疫苗的研制奠定了基础。

摘要：根据已发表的鹅副黏病毒基因组序列,设计并合成了扩增F基因和hn基因的5对引物,利用RT-PCR的特异性扩增出了广东省清远分离株(QY株)的F基因和hn基因。然后将其克隆入pMD 18-T载体,经鉴定、测序及拼接,QY株的F基因和hn基因全序列长度分别为1 662bp和1 716 bp,分别编码553个和571个氨基酸。经与GenBank登录的几株参考毒株F基因和hn基因编码区的核苷酸序列进行比较;结果,QY株与参考毒株SF02株和LaSota株F基因的核苷酸序列同源性分别为98.3%和82.4%,hn基因的核苷酸序列同源性分别为97.2%和75.9%。

摘要：用设计的特异性引物,通过RT-PCR法对2013年间分离自广西的具有一定代表性的2株鸡新城疫病毒（GX-79-13-Ch,GX-117-13-Ch）进行hn基因的扩增和克隆,并对其进行核苷酸序列测定和分析。2毒株hn基因开放性阅读框架（ORF）均为1 716 bp,二者之间的核苷酸序列同源性为99.5%,氨基酸同源性为99.0%。2个分离株hn基因核苷酸序列与国内外报道的相关序列同源性为81.2%~97.5%,推导氨基酸序列同源性为88.2%~97.6%。由系统发育树可见,与现今流行于国内的Ⅶ型病毒株有较高的同源性,表明2个分离株与现今流行于国内的Ⅶ型病毒株有密切联系。

摘要：用RT PCR方法扩增了新城疫病毒 (NDV)的完整hn基因序列 ;设计了 1对带有EcoRⅠ限制位点的引物 ,用PCR扩增出了hn基因片段。将该片段克隆至 pSOC质粒SOC基因 3′端 ,成功构建了重组质粒pSOC hn。用该重组质粒转化E .coliBL 2 1(DE3)感受态细胞 ,以终浓度 1mmol/mL的IPTG诱导表达。在SDS PAGE凝胶上可检测到分子质量约 6 7ku的特异条带 ,蛋白质印迹法证实 。

摘要：用设计的特异性引物,通过RT-PCR法对1999和2004年间分离自山东省的具有一定代表性的3株鸡新城疫病毒（ShD-2-04,ShD-3-99,ShD-5-04）进行hn基因的扩增和克隆,并对其进行核苷酸序列测定和分析。结果表明：3个毒株hn基因开放性阅读框架（ORF）均为1716bp,编码571个氨基酸,属强毒的C群;3株山东分离毒的核苷酸同源性为98.2%-98.8%,氨基酸同源性为98.4%-98.8%,其中ShD-2-04和ShD-5-04核苷酸及氨基酸同源性均为最高,达到99.8%和99.8%;将3株山东分离毒株与国内外标准强毒株及弱毒株的hn基因核苷酸及氨基酸同源性分别进行比较：3毒株与国内外标准毒株hn的核苷酸同源性为82.7%-87.2%,氨基酸同源性为87.6%-90.0%,表明已发生一定的变异。

摘要：应用一对自行设计的引物 ,通过反转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)获得新城疫病毒 (NDV) Lasota株的血凝素神经氨酸酶 (hn)基因片段 ,其长度约为 1 .7kb,与已报道的 NDV-hn基因片段大小一致。再将该 hn基因片段定向插入真核表达质粒 pc DNA3中 ,经酶切和测序鉴定 ,表明构建的重组质粒含有 NDV-hn基因片段。

摘要：为了获得新城疫病毒(NDV)hn基因和重组表达蛋白,试验采用基因克隆和原核表达的方法,以NDV La Sota毒株为参考毒株设计特异性引物,利用RT-PCR技术从NDV La Sota毒株中扩增出去信号肽和跨膜区的hn基因(大小为1 593 bp),将其克隆至p BluscriptⅡKS(+/-)多克隆位点,再将hn基因亚克隆到原核表达载体p ET-28a中,构建重组表达质粒p ET-28a-NDV-hn,并用IPTG诱导表达,最后进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果表明:重组蛋白获得高效表达,且具有良好的免疫反应性。

摘要：从高发病率高死亡率的鸡群中分离到 1株病毒 ,经病毒分离鉴定为 NDV。生物学特性研究证实为强毒株 ,但血凝价偏高。根据保守区设计一对特异性引物 ,经 RT- PCR扩增得到其保护性抗原之一 hn基因 ,包含完整的 ORF。序列测定得到

摘要：将新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)感染健康鸭胚,采用尿囊液方法提取总RNA,根据GenBank已发表的新城疫病毒hn基因序列设计一对引物,以一株鸭源NDV的总RNA为模板,经RT-PCR扩增出约1.7kb的hn基因片段.将其克隆到原核表达载体pET-30a,获得重组质粒pET-hn后,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞.重组菌经IPTG诱导表达后,裂解产物进行SDS-PAGE分析,结果发现在约64ku处可见预期条带.Western-blot结果表明:表达的hn蛋白可与NDV阳性血清发生特异性结合,具有良好的反应原性,本结果为鸭源NDV抗体检测提供了理论依据.