摘要：背景与目的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)作为肺癌的一种,由于其高发病率一直备受关注。准确揭示其发病机制对于NSCLC的诊断以及治疗具有重要的指导意义。MATF-A作为转录调控因子在多种肿瘤的发生发展过程中发挥着重要作用,可以调控多种肿瘤细胞的迁移过程。hotair是近年研究发现的一个长链非编码RNA,在多种肿瘤中异常表达并参与多种肿瘤的增殖及迁移的进程。本研究旨在探究MRTF-A通过hotair调控NSCLC的增殖及迁移进程。方法构建MRTF-A的过表达质粒及干扰质粒,检测对A549细胞增殖及迁移的影响。设计合成hotair的si RNA检测对A549细胞增殖及迁移的作用。q RT-PCR检测MRTF-A对hotair表达的调控作用。构建hotair的启动子检测MRTF-A对hotair启动子活性的影响。结果过表达MRTF-A促进A549细胞的增殖,沉默MRTF-A的表达抑制A549细胞的增殖及迁移。干扰hotair的表达抑制A549细胞的增殖及迁移。MRTF-A能够影响hotair的表达,同时能够调控hotair启动子的活性。结论 MRTF-A通过hotair调控NSCLCA549细胞的增殖及迁移进程。

摘要：目的预测并验证HOX转录反义RNA(hotair)通过上调miR-152-3p对人类白细胞抗原-G(HLA-G)靶向调控作用。方法利用生物信息学网站及软件预测miR-152-3p与hotair和HLA-G基因3′非翻译区(UTR)的结合位点,设计合成含有与miR-152-3p结合位点的hotair和HLA-G基因3′-UTR序列及其突变序列,并构建hotair和HLA-G野生型和突变型双荧光素酶报告基因载体。经双酶切电泳和测序鉴定后,hotair和HLA-G野生型与突变型双荧光素酶报告基因载体分别与miR-152-3p模拟物(mimics)和miRNA无义序列阴性对照(mimicsNC)共转染HTR-8/SVneo细胞,检测荧光素酶活性,观察miR-152-3p对hotair和HLA-G表达的影响。结果双酶切电泳和测序结果显示,野生型和突变型的hotair和HLA-G基因载体片段大小、序列与实验预期一致,载体构建成功。转染miR-152-3pmimics后的hotair及HLA-G野生型荧光素酶活性显著降低(P0.05)。结论hotair通过上调miRNA-152-3p靶向调控HLA-G。

摘要：旨在通过生物信息学分析,预测与hotair相互作用的转录因子、蛋白质及miRNA,为阐明黑色素瘤致病的分子机理提供研究方向,为设计新的药物提供靶标和治疗黑色素瘤提供理论基础。本试验在UCSC数据库中下载8个物种的hotair序列,通过MEGA4.0构建系统进化树;运用lncRNAtor等数据库对长链非编码RNA hotair的上游调控因子,互作的miRNA及相关蛋白进行分析;利用NONCODE和lncDisease等数据库分析hotair在各组织的表达模式及与hotair相关的疾病;使用TargetScan软件在线预测与黑色素瘤紧密相关的一些基因的靶标miRNAs;运用Cytoscape3.2.0软件绘制miRNA-hotair-黑色素瘤相关基因的分子调控网络图。结果表明,hotair定位于人类12q13.13染色体上HOXC11与HOXC12基因的54 356 092~54 368 740nt位点之间,并且hotair在不同的物种之间具有一定的保守性。hotair在不同的细胞中受到多种调控因子的调控。hotair特异表达于各个组织,在睾丸中的表达量明显高于其他组织,而在肺和卵巢中的表达量明显低于其他组织。GO功能分析发现,hotair的靶基因参与细胞凋亡、DNA复制、转录调控等生物学过程,表明hotair在癌症和一些人类疾病的病理及生理学过程中发挥着重要的作用。在hotair的互作分析中发现,hotair与miR-217、miR-203和miR-194等均有互作位点。结果显示,在黑色素瘤中,hotair可能会与MITF和NKX3-1等黑色瘤关键基因竞争性结合miR-217、miR-203和miR-194,从而实现hotair对黑色素瘤的调控,但还需要进一步的试验证明。GO功能分析和KEGG通路分析发现hotair的表达水平与肿瘤的转移、复发以及预后紧密相关,结合一些转录因子对hotair的调控为肿瘤的治疗提供一定的理论基础。

摘要：目的:研究下调长链非编码RNA hotair的表达水平对舌鳞状细胞癌细胞株CAL-27和SCC-9放射敏感性的影响。方法:设计3条干扰hotair的序列,通过慢病毒载体转染至CAL-27和SCC-9中,运用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)验证干扰效率。将细胞分为空白组(CAL-27、SCC-9)、实验组(si-hotair CAL-27、si-hotair SCC-9)、阴性对照组(si-NC CAL-27、si-NC SCC-9),再将以上细胞给予8 Gy电子线照射,MTT法检测各组细胞增殖,划痕实验检测各组细胞迁移,流式细胞实验检测各组细胞凋亡情况。结果:在3条慢病毒载体中,si-2及si-3可下调hotair在CAL-27和SCC-9中的表达(P<0.05),且si-3干扰效率最高(P<0.05),在接受8 Gy电子线照射后,与对照组(si-NC CAL-27、si-NC SCC-9)相比,实验组(si-hotair CAL-27、si-hotair SCC-9)的增殖能力明显减弱(P<0.05);细胞凋亡率增加[(23.87±1.97)%vs.(46.03±2.49)%,(15.99±0.76)%vs.(39.38±2.95)%],迁移率下降[65.85%vs. 58.82%,47.81%vs. 37.78%],差异有统计学意义(P<0.05)。结论:降低hotair的表达水平可提高舌鳞癌细胞CAL-27和SCC-9的放射敏感性。