摘要：旨在以乙肝病毒（HBV）的主要结构蛋白-表面蛋白（HBsAg）和核心蛋白（HBcAg）作为抗原设计DNA疫苗,研究热休克蛋白hsp70和gp96作为新型免疫佐剂增强疫苗的细胞免疫和体液免疫水平。利用酶联免疫斑点实验、流式细胞内因子染色、3H-TdR实验、酶联免疫吸附实验技术分析,结果显示hsp70和gp96可使疫苗的细胞免疫水平提高1~6倍,提高体液免疫水平20%~60%。研究结果为设计以hsp70和gp96作为免疫佐剂的新型乙肝治疗性疫苗提供了依据。

摘要：目的探讨热应激蛋白(heatshockprotein70,hsp70)作为职业紧张程度客观评价指标的可行性。方法采用一般工作紧张问卷对某市公安局的全体刑警和巡警、某空军机场的全体地勤人员和某钢铁集团公司设计院的全体设计人员325人进行职业紧张调查、血糖、血脂、单胺类神经递质和hsp70抗体测定。结果3种职业人群hsp70抗体总阳性率为48.92%,紧张的临界值为1∶80;3种职业人群以及不同职业人群,均表现为抗体水平随紧张程度增加而增高,hsp70抗体水平与心理卫生呈负相关,与单胺类神经递质水平呈正相关。结论hsp70抗体水平可作为职业紧张程度的直接而客观评价指标,且具有可行性。

摘要：目的构建hsp70的短发夹状RNA(shRNA),检测其在胃癌细胞株SGC-7901中对hsp70基因表达的抑制作用以及对肿瘤细胞增殖的影响。方法根据hsp70编码基因,设计并合成2对反向重复序列,同时设计1对与目的基因不相匹配的重复序列作为对照组分别定向克隆至载体pTZU6+1的U6转录启动子下,构建重组质粒phsp1-siRNA,phsp2-siRNA及对照组质粒phsp3-siRNA,分别转染胃癌细胞株SGC-7901,采用RT-PCR和Western blot检测phsp-siRNA对hsp70基因表达的抑制作用。利用AlamarBlue法检测转染后对胃癌细胞生长的影响。结果酶切电泳分析和DNA测序证实重组质粒phsp-siRNA构建成功;证实phsp1-siRNA和phsp2-siRNA对内源性hsp70基因的表达有明显的抑制作用,同时phsp1-siRNA和phsp2-siRNA转染组细胞的生长较对照组受到明显抑制。结论构建的重组质粒phsp1-siRNA和phsp2-siRNA能特异而有效抑制内源性hsp70基因在SGC-7901细胞中的表达,并对细胞生长有明显抑制作用。

摘要：绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)是绵羊传染性胸膜肺炎(Contagious ovine pleuropneumo-nia)的主要致病菌。热休克蛋白hsp70也叫(DnaK),具有分子伴侣和免疫的作用。本试验以MO Y98基因组为模板,通过比对15种支原体hsp70基因的序列并设计简并引物,分别利用同源克隆和染色体步移—Tail-PCR技术克隆到了四段hsp70(DnaK)基因片断并进行了核苷酸序列测定。利用序列拼接软件对克隆的四段序列进行序列拼接,通过ORF Finder软件分析出了MO Y98的hsp70的开放式阅读框架,预测分析该基因是由1 815bp组成,编码604个氨基酸。本试验于国内外首次克隆到了MO的hsp70基因序列,为MO的抗原研究以及hsp70的功能研究等奠定了基础。

摘要：利用设计合成的地高辛标记的黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)hsp70 DNA探针,整体原位杂交检测热休克反应中,hsp70 mRNA在胚胎发育各阶段的表达情况.实验发现,在正常温度下黑腹果蝇的胚胎检测不到hsp70 mRNA存在.在热激的果蝇胚胎中,可检测到hsp70 mRNA的广泛存在.hsp70 mRNA在热激的胚胎中,除早期细胞化囊胚的极细胞外,其余细胞均可检测到hsp70 mRNA的均一分布.随着胚胎发育,hsp70 mRNA仍广泛分布在各细胞中,晚期胚胎中神经细胞hsp70 mRNA比其余细胞的表达水平高,说明神经细胞具有更高的热诱导活性,在热激反应中hsp70 mRNA的表达水平更高.

摘要：根据hsp70、hsp90和GAPDH基因mRNA序列,设计并合成3对引物,将PCR扩增的基因片段克隆到pGEM-T载体,重组质粒经筛选、鉴定,体外转录出RNA,系列稀释作为阳性标准品,用于标准曲线的绘制和样品检测,并用持家蛋白GAPDH基因对样品进行归一化,建立了一步法实时荧光定量RT-PCR技术平台,并对其扩增效率、敏感性、特异性进行了检测。结果证明,建立的一步法荧光定量RT-PCR技术可以真实地反映反应管中模板的数量,可用于猪hsp70、hsp90和GAPDH基因mRNA水平的检测。

摘要：依据GenBank已公布的鲫鱼热激蛋白70(Heat shock protein70,hsp70)和beta-actin mRNA序列,分别设计两对引物,应用半定量RT-PCR方法检测应激处理后不同恢复时期鲫鱼(Carassius auratus)肝脏中hsp70 mRNA的表达情况。结果表明,诱导后肝脏组织中hsp70 mRNA的表达量呈现时间依赖性,存在先升高后回落的趋势。在诱导后1h即有所升高,在4h时达到最高值,之后逐渐降低,至48h,表达量降至最初值。研究结果为鲫鱼hsp70的研究提供了基础数据,也为将hsp70用作鱼类生理状态的诊断提供了理论依据。

摘要：实验采用2×2双因子设计,研究两种温度下在饲料中添加大黄素对团头鲂(Megalobrama amblycephala)生长、血液生理反应及肝脏hsp70 mRNA表达的影响。选取300尾健康的团头鲂[初均重(7.29±0.01)g],两种温度下(25℃、30℃)分别投喂不添加和添加25 mg/kg的大黄素配合饲料,养殖时间为77d。结果显示:在长期30℃高温下,鱼体增重率(WGR)和特定生长率(SGR)、红细胞积压(HCT)、乳酸脱氢酶(LDH)显著升高,饵料系数(FCR)和脏体比(VSI)、谷草转氨酶(AST)、总胆汁酸(TBA)显著下降(P0.05),对尿素(UREA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、补体3(C3)、补体4(C4)和肝脏hsp70 mRNA的相对含量存在显著交互作用(P0.05),C3、C4和肝脏hsp70 mRNA的相对含量显著升高(P<0.05)。以上结果表明,在饲料中添加25 mg/kg大黄素有助于缓解长期高温对团头鲂血液生理的影响,提高补体水平和肝脏hsp70 mRNA的相对含量,促进鱼体的生长。

摘要：根据GenBank(D12692.1)上发表的牛瑟氏泰勒虫hsp70基因序列设计、合成1对特异性的引物,采用PCR方法扩增牛瑟氏泰勒虫hsp70基因片段,将扩增产物与pMD18-Tsimple载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序;用pGEX-4T-1表达载体构建重组质粒pGEX-hsp70,经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE、Western-blot分析。结果表明:扩增的hsp70基因与D12692.1序列同源性为99.3%;表达的融合蛋白分子质量约为68ku,而且可与牛瑟氏泰勒虫阳性血清发生特异性反应。

摘要：采用免疫组化法检测11例未经治疗的原发性肝癌(HCC)手术组织标本:MHC I类分子、hsp70的表达。结果发现,肝癌组织细胞MHCI类分子的表达与多数肿瘤细胞不同,其表达呈阳性,不存在MHCI类分子低表达或丢失的情况;与癌旁组织相比,肝癌细胞hsp70胞浆、胞膜表达呈强阳性,推测其原因可能是原位于胞浆的hsp70与MHC I类分子结合后被运输至细胞表面,并由此可能增强肝癌细胞的免疫原性,这将促使我们重新审视HCC疫苗设计的构思和考虑其治疗对策。