摘要：越来越多的研究表明许多致病菌的病原性与生物体内莽草酸途径中的分支酸变位酶(chorismate mutase,CM)有着密切的关系,因此CM成为了开发新型抗生素和抗菌药物的热门靶标酶。采用分子克隆的方法,在感受态细胞BL21-Gold(DE3)中重组表达大肠杆菌(***)T蛋白的CM(CM T)。通过Ni-NTA亲和层析柱、GE Superdex75凝胶过滤层析柱和GE MonoQ阳离子交换层析柱纯化后得到电泳纯的重组蛋白,质谱鉴定结果与原始序列基本吻合。经过蛋白质晶体试剂盒的初步筛选,在30%PEG 4000,100mmol/L NaAc pH4.6,200mmol/L NH4Ac条件中发现CM T晶体。利用核磁共振方法,分析CM T的1H-15N hsqc谱图信息,指导设计CM T晶体的优化方案,成功获得高衍射能力的CM T晶体,为CM T结构的解析奠定了坚实的基础。

摘要：SHP-2蛋白是一种含有两个SH2结构域的磷酸酶。SHP-2的N端SH2结构域是细胞因子或病毒因子激活该蛋白的分子内靶点。对shp2基因进行信息学分析,设计引物通过PCR克隆出人SHP-2蛋白N端SH2结构域(NSH2)的DNA序列。重组到原核表达载体pGEX-2T中,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功高效率表达了可溶性NSH2蛋白。对蛋白进行15N同位素标记和纯化,并浓缩获得达到进行核磁滴定法结构研究的蛋白样品。