摘要：本实验建立了一种应用金标链霉亲和素探针的目视化高灵敏度检测单纯疱疹病毒2型(HerpesSimplexVirus-2,hsv-2)的基因芯片。该芯片以hsv-2DNA聚合酶的高保守区为靶序列,设计hsv-2特异性引物和探针,通过PCR反应使扩增产物标记上生物素;氨基修饰的探针固定在活化的玻片上,与生物素标记的扩增产物杂交;利用生物素与链酶亲和素高亲合力的特性,加入纳米金标记的链酶亲和素后形成生物素-链酶亲和素-纳米金生物反应放大系统;银染反应后,达到目视化检测hsv-2效果。该hsv-2检测基因芯片能目视化检测出100fmol/L的hsv-2扩增产物,具有灵敏度高,低成本的特点,通过临床标本验证表明该芯片具有较高的准确性。

摘要：目的利用简并引物PCR法及重叠PCR法构建HBsAg(S),hsv-2gD模拟抗原表位P6及天然抗原表位NP6,IL-18真核表达载体,并对其表达能力进行鉴定,为后期疫苗的研制奠定基础。方法采用简并引物PCR法扩增IL-18-P6(包括P6-IL-18)片段及IL-18-NP6(包括NP6-IL-18);根据GenBank(FJ589066.1)公布的S基因设计引物,扩增获得含有重叠区的S片段(包括S1,S2,S3,S4);采用重叠PCR法扩增三基因融合片段IL-18-P6-S,IL-18-NP6-S,S-P6-IL-18和S-NP6-IL-18,经纯化回收后将其克隆到原核载体pMD 18-T simple vector中,测序正确的目的片段插入真核表达载体pcDNA3.1(-),构建重组质粒pcDNA3.1-IL-18-P6-S,pcDNA3.1-IL-18-NP6-S,pcDNA3.1-S-P6-IL-18和pcD-NA3.1-S-NP6-IL-18,采用间接免疫荧光法检测靶基因的表达情况。结果成功构建了含有双抗原的真核表达载体pcDNA3.1-IL-18-P6-S,pcDNA3.1-IL-18-NP6-S,pcDNA3.1-S-P6-IL-18和pcDNA3.1-S-NP6-IL-18。脂质体介导真核表达载体转染CHO细胞,间接免疫荧光法检测细胞浆中有黄绿色荧光。结论构建的真核表达载体pcDNA3.1-IL-18-P6-S,pcDNA3.1-IL-18-NP6-S,pcDNA3.1-S-P6-IL-18和pcDNA3.1-S-NP6-IL-18能在CHO细胞中有效表达。

摘要：背景自商业提供了2型单纯疱疹病毒(hsv-2)抗体检测以来,经血清学检测所了解的患有生殖器疱疹的人数有所增多。血清阳性无症状者的hsv-2自然史病程尚不清楚。目的评估有症状及无症状hsv-2感染者生殖器hsv病毒脱落及临床过程。设计、设施和受试者将1992年3月至2008年4月,美国华盛顿大学西雅图病毒研究诊所及奥勒冈州波特兰韦斯托弗高地诊所,498例免疫活性hsv-2血清阳性者纳入前瞻性研究。每位参试者自用拭子采集生殖器分泌物至少30 d。主要结果测量对生殖器拭子hsv-DNA做实时荧光定量聚合酶链反应检测病毒脱落率。结果 将410例有症状hsv-2感染者生殖器4 753/23 683 d检出hsv-2[20.1%,95%CI(18.3%,22.0%)]与88例无症状感染者519/5 070 d进行比较(P<0.001)。临床症状不明显者比无症状感染者病毒脱落率要高,2 708/20 735 d[13.1%,95%CI(11.5%,14.6%)]对434/4 929 d[8.8%,95%CI(6.3%,11.5%)](P<0.001)。然而,亚临床症状脱落发生时hsv检出量相似,有症状感染组中位数4.3(四分位间距,3.1～5.6)log10 copies对无症状感染组4.2(四分位间距,2.9～5.5)(P=0.27)。有生殖器病毒脱落计算病变天数,有症状生殖器hsv-2感染者为2 045/4 753 d[43.0%,95%CI(39.8%,46.5%)]与无症状感染者85/519 d[16.4%,95%CI(11.2%,23.9%)]相比(P<0.001)。结论 与有症状感染者相比,无症状hsv-2感染者生殖道内病毒脱落频次要少,但由于病毒脱落伴发于病变,所致差异大部分可归因于生殖器发生的病变少所致。