摘要：以苯磺酰肼和4-二苯胺基苯甲醛为原料,通过缩合反应设计和合成了一种新型磺酰腙汞离子(Hg^(2+))探针N’-(4-(二苯氨基)亚苄基)苯磺酰腙(S1).在二甲基亚砜(DMSO)/H_(2)O(V∶V=7∶3,pH=7)溶液体系中,S1对Hg^(2+)展示出快速响应、高选择和高荧光灵敏性.通过^(1)H NMR和HRMS探究了可能的机理.聚丙烯酰胺(PAM)掺杂S1(PAMS)对Hg^(2+)有高的吸附性能,其去除率达到99.99%,并且在紫外灯下通过肉眼很容易区分.通过扫描电子显微镜(SEM)观察了PAMS吸附前后的微观形貌.此外,S1具有优异的生物相容性,可以极好地检测hela细胞中的Hg^(2+).

摘要：以2-(4-溴苯基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲醛、(4-(二苯基氨基)苯基)硼酸和氨基硫脲为原料,设计合成了一种新型的可高选择性快速识别Cu^(2+)的荧光探针分子N'-((2-(4'-(二苯胺基)-[1,1'-联苯]-4-基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)亚甲基)肼-1-硫代酰胺(DBTMC).DBTMC展示出优异的溶剂效应和聚集态效应,对Cu^(2+)展现出高选择、高灵敏和快速响应性,检测限为4.48×10^(-8) mol/L.通过job’s曲线、1H NMR滴定、HRMS及密度泛函理论(DFT)计算对其可能的响应机理进行了探究.用探针DBTMC制备的测试条,可用于快速检测Cu^(2+).将DBTMC应用于检测hela细胞中的Cu^(2+),也取得了良好的效果,具有潜在的应用价值.

摘要：目的:构建靶向Hax-1基因的短发夹状干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体pGenesil-Hax-1,并探讨siRNA靶向抑制Hax-1基因表达的作用。方法:根据shRNA设计的原则,在Hax-1全长序列中选取含19个核苷酸靶序列,设计形成siRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pGenesil-1中,获得可靶向抑制Hax-1基因的重组shRNA表达载体。采用LipofectamineTM2000转染试剂将pGenesil-Hax-1导入hela细胞中;分别采用RT-PCR以及Western blot从mRNA和蛋白水平上检测干扰效果。结果:半定量PCR及Western blot结果表明,siRNA可使Hax-1mRNA的转录水平得到显著抑制(P<0.01),Hax-1蛋白的表达较对照组减少约70%。结论:靶向Hax-1基因的重组shRNA表达载体pGene-sil-Hax-1介导的siRNA可显著抑制Hax-1基因在人宫颈癌hela细胞中的表达。

摘要：目的　有效抑制肿瘤细胞端粒酶活性 ,为肿瘤的基因治疗提供依据。方法　设计合成了针对端粒酶逆转录酶 m RNA5′端区的锤头状核酶 (5′- end of human telomerase reverse trascriptase m RNA,h TERT- 5′RZ)基因 ,并将该基因重组入 pc DNA3.1(+) ,经体外转录得到小片段 h TERT- 5′RZ。用脂质体介导法 ,将 h TERT- 5′RZ导入 He L a细胞以检测其对 He L a细胞端粒酶活性的抑制效力。同时比较了同法合成的针对端粒酶 RNA模板的核酶 (telomerase m RNA,telo RZ)和两种核酶混合物对 He L a细胞端粒酶活性的抑制效力。结果　小片段 h TERT- 5′RZ能有效抑制 He L a细胞端粒酶活性 ,且其抑制效力较单纯telo RZ为高 ,两种核酶混合物的端粒酶抑制效力与 h TERT- 5′RZ相当 ,也高于单纯 telo RZ。结论　小片段核酶 h TERT- 5′RZ可望成为优于 telo RZ的端粒酶抑制剂 ,在肿瘤基因治疗中发挥作用。

摘要：目的 利用RNA干扰（RNAi）技术沉默宫颈癌细胞系hela细胞中乙酰肝素酶（HPA）基因的表达,并探讨其对宫颈癌细胞侵袭力的影响.方法 根据GenBank数据库提供的HPA基因核苷酸序列,设计4对针对HPA基因的短发夹状RNA（shRNA）特异性寡核苷酸序列（即shRNA-HPA-592、shRNA-HPA-995、shRNA-HPA-1351、shRNA-HPA-1658）,并设计1条随机无关序列作阴性对照,分 别克隆到pYr-1.1质粒中.用脂质体法将上述质粒转染入hela细胞,以未转染质粒者为空白对照,采用逆转录（RT）-PCR技术、免疫荧光法分别检测转染后hela细胞中HPA mRNA和蛋白的表达,筛选出其中对HPA基因沉默效果最佳的质粒.将该质粒转染入hela细胞,采用穿膜（transwell）小室体外侵袭实验检测转染后hela细胞侵袭力的变化.结果 RT-PCR技术检测显示,转染shRNA-HPA-592、shRNA-HPA-995、shRNA-HPA-1351、shRNA-HPA-1658质粒后,hela细胞中HPA mRNA的表达水平分别为0.54±0.05、0.89 ±0.18、0.82±0.22、0.91 ±0.47,阴性对照和空白对照细胞中HPAmRNA的表达水平分别为1.31 ±0.72和1.09±0.16；免疫荧光法检测显示,转染上述不同质粒后hela细胞的胞质中均可见绿色荧光,HPA蛋白均呈阳性表达,其中转染shRNA-HPA-592质粒后hela细胞的胞质中绿色荧光强度最弱.故筛选出的对HPA基因沉默效果最佳的质粒即为shRNA-HPA-592质粒.体外侵袭实验检测显示,转染shRNA-HPA-592质粒后hela细胞的穿膜细胞数为（44±4）个,明显低于空白对照、阴性对照[分别为（182±6）、（258±17）个],差异有统计学意义（P＜0.01）；而阴性对照与空白对照比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 本研究成功筛选出了靶向HPA基因的shRNA表达质粒,转染宫颈癌hela细胞后可高效抑制其HPA基因的表达,明显降低宫颈癌细胞的侵袭力,为进一步研究HPA基因的表达与宫颈癌侵袭的机制奠定了基础.

摘要：目的 :观察 s- lap/ GFP融合蛋白在 hela细胞中的表达及定位。方法 :根据 s- lap基因的编码区序列 ,应用 PCR技术突变其 3′末端终止密码子 ,并通过基因重组技术将其与 GFP基因融合 ,构建 s- lap/ GFP重组质粒 ;采用脂质体转染法 ,将 s- lap/ GFP融合基因转入 hela细胞中 ,用荧光显微镜观察其表达。结果 :s- lap/ GFP重组质粒序列测定的结果与预期设计完全一致。荧光显微镜显示 ,在转染 GFP基因的 hela细胞中 ,荧光呈网状均匀分布于细胞浆内 ,而细胞核内低表达 ;在转染 s- lap/ GFP融合基因的 hela细胞中 ,荧光均匀分布于整个细胞 ,尤其以细胞核内高表达。结论 :s- lap/ GFP融合蛋白可在人 hela细胞中表达 ,并主要定位于细胞核。

摘要：目的通过观察乙酰肝素酶（HPA）抑制剂对子宫颈癌hela细胞体外生长的抑制作用及HPA表达的影响，为子宫颈癌HPA分子靶向治疗提供理论依据。方法优化设计并合成了两个系列共13种1，3-O，N螺杂环类化合物，产品编号为10～22号，其中21号为HPA抑制剂——DMB0化合物，余12种为新合成的化合物。其中，1个系列含甲氧苯基，产品编号为10-14号；另1个系列不含甲氧苯基，产品编号为15～22号。（1）采用乙酰肝素降解检测试剂盒检测新合成的化合物（选择与DMBO结构类似度高的6个化合物，即14、15、16、20、21、22号化合物）对HPA活性的作用，以50％抑制浓度（IC50）表示作用的强弱；（2）四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测新合成的化合物（7个化合物，即11、12、14、15、16、20、22号化合物）作用后hela细胞生长的抑制作用，选择抑制作用最大的化合物（即16号化合物）用于以下实验；（3）细胞划痕实验观察16号化合物作用后hela细胞迁移能力的变化；（4）流式细胞仪检测16号化合物作用后hela细胞的细胞周期比例和细胞凋亡率的变化；（5）实时定量逆转录（RT）-PCR技术、蛋白印迹法和免疫组化法检测16号化合物作用后hela细胞中HPAmRNA和蛋白表达的变化。结果（1）6个新合成的化合物（即14、15、16、20、21、22号化合物）对HPA活性均有不同程度的抑制作用，除22号化合物抑制作用不明显无法测出IC50值外，14、15、16、20、21号化合物的Ic，。值分别为4．47、21．81、8．36、14．13、47．19μmoFL。（2）MTT比色法检测显示，不同浓度（分别为1、5、15、30、60、120、180、240μmol／L）的7个新合成的化合物（即11、12、14、15、16、20、22号化合物）作用48h对hela细胞的生长均有抑制作用，并呈明显的浓度依赖性（P〈0．01），其中16号化合物的抑制效果最显著（IC50值为48．16μmoFL）；进一步检测显示，16号化合物作用不同时间（分别为24、48、72、96h）后对hela细胞生长的抑制作用呈明显的时间依赖性（P〈0．01）。（3）细胞划痕实验观察显示，作用24h后，实验组（加入50μmol／L的16号化合物，下同）hela细胞迁移能力明显受到抑制，其划痕的宽度明显大于对照组（不加16号化合物，下同）。（4）流式细胞仪检测显示，作用48h后，实验组hela细胞GdG1期、G2/M期比例分别为（75．85±1．77）％、（11．65±0．64）％，均明显高于对照组[分别为（49．10±3．11）％、（0．17±0．24）％；P〈0．01]；S期细胞比例为（12．50±1．13）％，明显低于对照组的（50．70±2．83）％（P=0．003）。实验组hela细胞的凋亡率为（11．9±1．2）％，明显高于对照组的（6．6±1．8）％（P=0．013）。（5）实时定量RT—PCR技术和蛋白印迹法检测显示，作用48h后，实验组hela细胞中HPAmRNA和蛋白的表达水平分别为1．23±0．46和0．46±0．31，明显低于对照组的3．43±0．45和1．30±0．58（P〈0．05）；免疫组化法检测显示，实验组累积吸光度（伪）值为0．39±0．04，对照组为0．50±0．09，两组比较，差异有统计学意义（P=0．026）。结论新型1，3-O，N螺杂环类HPA抑制剂可能通过凋亡途径显著抑制子宫颈癌hela细胞的生长；该类抑制剂可明显抑制hela细胞的HPA活性，并下调其HPAmRNA和蛋白的表达。

摘要：目的研究多梳蛋白家族成员NSPc1对hela细胞增殖的影响。方法运用生物信息学设计并合成敲低NSPc1表达的siRNA序列,用半定量RT-PCR、Real-time PCR及Western blot等检测siRNA序列在hela细胞中敲低NSPc1的有效性;将相应有效序列构建到pSUPER载体中,观察其瞬时转染对hela细胞BrdU掺入的影响;用G418筛选并建立稳定敲低NSPc1的hela细胞系,观察敲低NSPc1对hela细胞体外增殖能力的影响。结果(1)设计的siRNA序列可显著敲低NSPc1的表达;(2)瞬时敲低NSPc1阻碍了hela细胞BrdU的掺入;(3)成功构建稳定敲低NSPc1的hela细胞系,其增殖速度较对照组明显变慢。结论NSPc1的正常表达是维持hela细胞正常增殖能力所必需的,稳定敲低NSPc1的hela细胞群可作为进一步研究NSPc1相关信号通路的有效模型。

摘要：目的以高表达脑源性神经营养因子（BDNF）的宫颈癌细胞系hela细胞为模型，筛选针对BDNF基因的有效干扰RNA序列，并观察BDNF基因沉默对hela细胞增殖和凋亡的影响。方法设计和构建两个针对人BDNF基因的siRNA真核表达载体，经酶切鉴定和DNA序列分析鉴定后用脂质体Lipofectamine 2000介导转染，将空载体质粒pGenesil-1和两个重组质粒pGenesil—shRNA—BDNF1、pGenesil—shRNA—BDN心分别转染人人hela细胞（依次命名为P0、P1和R组）；采用RT—PCR和Western blot法分别从mRNA水平和蛋白水平检测BDNF表达的变化；四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞的增殖水平；流式细胞仪和Hoechest33258染色检测细胞凋亡。结果成功构建了针对BDNF的siRNA真核表达载体。P1组与未转染、P0、P2组相比，BDNFmRNA表达水平（F=48．19，P〈0．01）和BDNF蛋白表达水平（F=13．74，P〈0．01）均明显降低，P2组则未达实验预期的干扰目的（P〉0．05）。通过MTr实验，发现P．组细胞生长速度明显减慢，增殖高峰后移；流式细胞术检测证实早期凋亡率P1组[（53．4±4．2）％]明显高于未转染组[（0．8±0．4）％]、P。组[（5．1±1．8）％]和P2组[（7．9±2．4）％；F=269．77，P〈0．01]。结论BDNF基因高表达于宫颈癌细胞系hela细胞，BDNF基因沉默能明显增加hela细胞的凋亡并抑制其增殖，提示BDNF基因可能成为恶性肿瘤治疗的新靶点。

摘要：设计3个针对MALAT1不同靶序列的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),筛选出有效的siRNA序列,设计并构建短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰质粒,转染到hela细胞中,构建低表达MALAT1的稳定细胞株.通过细胞的生长曲线和细胞划痕实验验证降低MALAT1对hela细胞增殖和迁移的影响.结果显示MALAT1表达水平在hela细胞中得到有效地降低,低表达MALAT1的hela细胞生长速度和迁移速度减小.表明MALAT1在hela细胞中具有调控细胞增殖和迁移的能力.