摘要：目的针对Akt2基因构建shRNA慢病毒干扰载体并评价慢病毒介导的RNA干扰在人hepg2.2.15中的基因沉默效应。方法设计Akt2的RNAi寡聚核苷酸序列,利用慢病毒载体构建Akt2的shRNA载体,转染入大肠埃希菌并观察重组表达状况,利用293T细胞包装得到重组腺病毒,以绿色荧光蛋白(GFP)作为标记,逐孔稀释法确定转染效率及滴度,以实时荧光定量法比较各组对Akt2 mRNA的干扰效果。结果筛选了所构建的3个Akt2靶向序列,包装shRNA慢病毒后转染hepg2.2.15细胞,慢病毒转染后的沉默效率可达85%,比较得出沉默效率最高的靶序列和工作条件。结论本研究成功构建并筛选了针对Akt2的shRNA慢病毒载体,有效抑制hepg2.2.15细胞中Akt2 mRNA的表达。

摘要：目的探讨靶向作用于乙型肝炎病毒C区基因的M1GS RNA核酶胞内抗乙型肝炎病毒的作用。方法设计并应用PCR技术合成M1RNA核酶，应用pEGFP-C1载体构建M1GSRNA核酶的真核表达质粒，应用脂质体Lipofectamine TM 2000转染hepg2.2.15细胞，以ELISA法检测细胞培养液中病毒抗原，以反转录-聚合酶链反应法（RT-PCR）检测细胞内病毒mRNA，以荧光定量PCR法检测分泌入培养液的HBVDNA含量，用MTT法检测核酶对细胞增殖活性的影响。结果质粒载体表达的M1GS RNA核酶能明显抑制细胞培养液中HBeAg的表达及病毒mRNA的表达，抑制率分别为31．58％，32．5％。但M1GS RNA核酶对培养液中的HBV DNA含量无明显影响，亦不影响hepg2.2.15细胞的增殖活性。结论M1GS RNA核酶能特异性抑制hepg2.2.15细胞内HBV C区基因表达，是一种很有潜力的抗HBV基因治疗方法。

摘要：目的:观察灵猫方药物血清对hepg2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的抑制效果。方法:应用SD大鼠备置5倍和10倍灵猫方药物血清、生理盐水大鼠血清,将3种血清分别作用于hepg2.2.15细胞,在第72小时、96小时、144小时收集细胞培养上清液,采用ELISA法检测HBsAg、HBeAg。结果:与生理盐水大鼠血清相比较,灵猫方药物血清在72小时后即产生抑制hepg2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的作用,96小时时对乙肝病毒(HBV)的抑制率达到高峰,在144小时对HBV的抑制率有所下降;5倍灵猫方药物血清和10倍灵猫方药物血清在抑制hepg2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg方面,差异无显著性意义。结论:灵猫方药物血清在体外具有一定的抗HBV的作用。