摘要：【目的】原核表达禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)hexon蛋白,并制备兔抗hexon多克隆抗体,为FAdV-4 hexon功能研究提供材料。【方法】采用基于PCR的长DNA序列准确合成(PCR-based accurate synthesis,PSA)方法,设计全长拼接引物,在引物两端各设计保护性碱基合成FAdV-4 hexon基因;利用同源重组技术将其连接至pCzn1-hexon表达载体,获得pCzn1-hexon重组质粒进行原核表达,采用纯化重组蛋白免疫新西兰白兔制备兔抗hexon蛋白的多克隆抗体。以间接ELISA方法测定多克隆抗体效价;通过Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定多克隆抗体的特异性。【结果】重组原核表达质粒pCzn1-hexon经双酶切及测序鉴定证明构建正确;获得的重组蛋白以包涵体的形式表达,分子质量约为41 ku;用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔后,通过间接ELISA方法检测抗体效价高达1∶512000。以制备的多克隆抗体为一抗,通过Western blotting和IFA检测到鸡肝癌细胞(LMH)中的hexon蛋白表达,表明制备的多克隆抗体能与hexon蛋白发生特异性反应。【结论】FAdV-4 hexon蛋白在大肠杆菌中实现了高效表达,制备并纯化的抗hexon多克隆抗体具有较高的反应性和特异性,该研究为进一步探究hexon蛋白的生物学功能及其在FAdV-4感染和致病过程中的作用奠定了基础。