摘要：目的设计并合成一系列2-[(反式-4-羟基环己基)氨基]苯甲酰胺类hsp90抑制剂,测试其与氟康唑联合使用对耐药真菌的抑制活性。方法以2-溴-4-氟苯腈为起始原料,经亲核取代、Buchwald-Hartwig偶联和氰基水解得到化合物A1~A7;以2-氟-4-(溴甲基)苯腈为起始原料,经亲电取代、亲核取代和氰基水解得到化合物A8和A9;以2-巯基苯并咪唑及其衍生物为起始原料,经Ullmann偶联、亲核取代、Buchwald-Hartwig偶联和氰基水解得到化合物A10~A16。采用二倍稀释法,以氟康唑与化合物SNX-2112联合使用为阳性对照,氟康唑单独使用为阴性对照,测定目标化合物对6种氟康唑耐药真菌(Strain 901、Strain 904、Strain 632、Strain 100、Strain 103和Strain 311)的抑制活性。结果与结论合成了16个2-[(反式-4-羟基环己基)氨基]苯甲酰胺类化合物,其结构均经核磁共振氢谱和质谱确证,体外抑菌活性测试结果表明,大多数目标化合物对测试耐药真菌均表现出不同程度的抑制作用,其中与氟康唑联合使用时目标化合物A11的抑菌活性略优于先导化合物SNX-2112。本研究对氟康唑与hsp90抑制剂联合使用的抗耐药真菌活性进行了初步探索,为后续更深入的研究提供了有价值的参考。

摘要：热休克蛋白90(hsp90)是生物进化过程中高度保守的一类蛋白,作为分子伴侣对细胞中众多信号蛋白的构象成熟和功能稳定进行调控。近年来的研究证明,hsp90与肿瘤发生、发展、生物学行为及其预后有密切的关系,已成为新兴的抗肿瘤药物作用靶点,众多hsp90抑制剂应运而生,同时基于结构的小分子抑制剂的设计也引起日益广泛的关注,本文就hsp90的结构特点及其相关抑制剂进行综述,以期对hsp90抑制剂的发现和优化提供依据。

摘要：本文利用荧光偏振法(FP)构建分子伴侣hsp90的筛选平台,筛选得到黄酮类化合物木犀草苷,并用热稳定实验验证了它与蛋白的结合作用;评价了木犀草苷对14株癌细胞的体外增殖抑制作用,发现木犀草苷对非小细胞肺癌有良好的选择性抑制活性;利用细胞克隆形成、western blot以及流式细胞检测技术进一步深入研究其可能的作用机制,发现木犀草苷能剂量依赖性地抑制非小细胞肺癌的增殖;下调hsp90的客户蛋白Raf-1、HER2的表达;将H460细胞阻滞在G2/M期;诱导细胞凋亡,并且引起Bax的表达上调。实验结果表明,黄酮类化合物木犀草苷可以通过抑制hsp90的活性进而降解肿瘤细胞内的客户蛋白,诱导H460细胞G2/M期阻滞,上调Bax表达诱导细胞凋亡来发挥抗肿瘤活性。

摘要：根据hsp70、hsp90和GAPDH基因mRNA序列,设计并合成3对引物,将PCR扩增的基因片段克隆到pGEM-T载体,重组质粒经筛选、鉴定,体外转录出RNA,系列稀释作为阳性标准品,用于标准曲线的绘制和样品检测,并用持家蛋白GAPDH基因对样品进行归一化,建立了一步法实时荧光定量RT-PCR技术平台,并对其扩增效率、敏感性、特异性进行了检测。结果证明,建立的一步法荧光定量RT-PCR技术可以真实地反映反应管中模板的数量,可用于猪hsp70、hsp90和GAPDH基因mRNA水平的检测。

摘要：B型烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)biotype B和温室白粉虱Trialeurodes vaporariorum均为全球普遍发生的重要害虫。本研究以其他昆虫热激蛋白90基因(hsp90)保守区域设计兼并引物扩增两种粉虱hsp90中间片段,然后利用RACE技术获得全长cDNA。温室白粉虱hsp90全长cDNA的开放性阅读框2166bp,编码722个氨基酸;烟粉虱hsp90全长cDNA的开放性阅读框2160bp,编码720个氨基酸。两种粉虱hsp90的完整氨基酸序列相似性高达92.94%,并均具有定义hsp90家族签名序列的5个氨基酸保守区域和末尾基序"MEEVD"。通过real-time PCR技术,探测到两个基因在mRNA水平上皆能高温诱导表达。采用昆虫纲所有完整hsp90氨基酸序列进行Kimura双参数遗传距离分析并构建NJ进化树,结果显示hsp90在昆虫纲低级阶元水平和高级阶元水平系统进化上能得到一个较理想结果。本研究结果为B型烟粉虱和温室白粉虱抗逆适应性研究提供基础,并进一步验证保守的功能基因hsp90可以作为研究生物系统发育的手段之一。

摘要：本研究旨在分析热休克蛋白90(hsp90)基因的保守性,并为寻找新的hsp基因,探索hsp90的应用提供理论数据。利用CODEHOP设计简并引物,采用PCR方法克隆鲫鱼的hsp90序列,并将扩增的序列克隆到pMD18-T载体中构建克隆载体后进行测序,再将测序结果通过BLAST进行同源性比对并构建系统进化树。结果显示,鲫鱼与鲤鱼的同源性为99%;与斑马鱼的同源性为92%。本试验设计出的引物简并度较低,Tm值的修改较为灵活,产物特异性强,为研究鲫鱼的功能基因提供基础保障,并为热休克蛋白在进化上的保守性研究奠定理论基础。

摘要：根据斑马鱼hsp90(Heat shock protein)序列(NM_131328)设计并合成一对引物,提取草鱼肝脏组织总RNA,RT-PCR扩增获得草鱼hsp90基因cDNA部分序列596 bp,获得GenBank登陆号为FJ517554。将测序结果利用DNAman软件与其他几种已知序列的鱼进行比对,结果表明,草鱼hsp90与斑马鱼、鲤、鲋的同源性依次为90%、89%、92%。同时利用半定量(Semi-quantitative,SQ)RT-PCR技术检测hsp90在草鱼脂肪、肌肉、肠、脑、粘液、性腺、鳔、肝脏、心脏、脾脏、鳃、鳍12个组织的表达差异。结果表明,hsp90在草鱼除了鳍外的其他11个组织中均检测到表达,其中在心脏中表达最高,但与鳃、性腺、脑、脾脏中的表达无显著差异(P>0.05),在脂肪、粘液、鳔组织中的表达显著低于其他几种组织(P0.05)。

摘要：根据热激蛋白90(the heat shock proteins90,hsp90)基因序列的保守性,设计引物,采用PCR结合RACE扩增的方法克隆得到中红侧沟茧蜂Microplitis mediatorHaliday hsp90cDNA全序列,并用半定量RT-PCR的方法研究hsp90与中红侧沟茧蜂发育及滞育间的关系。结果表明,滞育条件和非滞育条件下,热激和冷激都能诱导hsp90的表达;不论在滞育还是非滞育条件下,hsp90表达量均在2龄初期最高,随发育时间的增加逐渐降低,成虫期表达量又显著升高;滞育褐茧在4℃保存初期,hsp90呈现高表达且随保存时间的增加而降低。