摘要：目的:建立一套快速、灵敏、高效的怀地黄TMV检测技术,为怀地黄TMV的脱毒检测提供技术支持,以实现怀地黄脱毒苗的产业化生产,改善病毒病引起的品种退化现象。方法:根据GenBank上登录的TMV外壳蛋白基因保守序列,设计特异性引物,利用免疫捕捉rt-pcr(ic-rt-pcr)技术检测怀地黄中的TMV,并对pcr扩增产物进行测序。结果:利用ic-rt-pcr技术扩增出了预期目的条带,其扩增产物与地黄TMV CP基因(登录号为AY555269)核苷酸序列的同源性达95.29%,氨基酸同源性达96.7%。结论:建立了怀地黄TMV的ic-rt-pcr检测技术,集免疫学与分子生物学检测技术于一体,灵敏度高,操作简便,适合于怀地黄TMV的快速检测。

摘要：针对感染李坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)植株病毒的特异性检测,将DAS- ELISA、rt-pcr方法综合改进、优化,建立了免疫捕获反转录pcr(ic-rt-pcr)检测PNRSV的方法.该方法采用PNRSV抗体特异性免疫捕获病毒,并根据GenBank中PNRSV序列设计的特异性引物对PN5/PN3进行pcr扩增,得到约760 bp大小的特异性基因片段.扩增产物经克隆测序后,结果表明:产物序列与PNRSV的外壳蛋白编码基因存在94%～98%的同源性.检测广泛性以及灵敏度比较研究显示.ic-rt-pcr方法能从含量很低的受病样品中检出PNRSV,检测灵敏度与rt-pcr相近,但所检测样品的范围更广,适用于从植物各部位检测低含量的病毒.ic-rt-pcr检测灵敏度比DAS-ELISA方法高出1000倍.