摘要：白介素-6(il-6)/转录激活因子(STAT)信号通路的活化与动脉粥样硬化(AS)的发生发展密切相关。本研究以我国天然产物单体盐酸小檗碱(BBR)为先导物,通过在其3-位或/和9-位引入不同类型的侧链基团,设计合成了一系列全新结构BBR衍生物,并对其抑制il-6诱导的STAT1/3的磷酸化进行了评价。构效关系表明,3-位或9-位引入刚性结构有利于活性提高,其中,化合物2b和9显示出最优的抑制活性。进一步研究提示,化合物2b和9通过激活HUVEC细胞中AMPK活性,抑制il-6诱导的STAT1和STAT3磷酸化。研究结果显示,BBR衍生物通过AMPK途径抑制il-6/STAT信号通路介导的炎症反应,为此类化合物发展成为抗AS候选物提供了有益的科学数据。

摘要：目的设计合成靶向NF-κB的哑铃形诱骗剂ODN,分析靶向NF-κB的哑铃形诱骗剂对NF-κB转录活性、多发性骨髓瘤细胞8266的生长及其分泌的il-6的抑制效应。方法采用电泳迁移率变动分析(EMSA)体外检测诱骗剂ODN对NF-κB转录活性的抑制效应。将8266细胞随机分为传代培养的8266细胞组;诱骗剂ODN处理组及脂质体处理组。通过阳离子脂质体以2mg/L、4mg/L、8mg/L不同剂量诱骗剂ODN转染8266细胞。转染后8、12、18h,ELISA法检测8266细胞培养上清中il-6的表达。用MTT比色检查诱骗剂ODN对il-6刺激的8266细胞生长的影响。结果硫代磷酸的诱骗剂ODN在体外能有效地抑制NF-κB与其顺式元件的结合;2mg/L、4mg/L、8mg/L等不同浓度的脂质体-ODN复合物对8266细胞表达il-6的抑制程度不同。脂质体-ODN复合物对8266细胞的生长及il-6的活性均有抑制作用。结论靶向NF-κB的诱骗剂ODN在体外可抑制NF-κB的转录活性,从而抑制8266细胞的生长,降低瘤细胞中il-6的表达。

摘要：目的：为了制备高纯度、高活性的重组人白细胞介素与。方法：化学诱导重组表达载体pT7．7hil-6进行蛋白表达，菌体经超声破碎分离包涵体，并对包涵体进行洗涤、变性和复性处理，用DEAE-Sepharose CL-6B弱阴离子交换柱一步纯化复性的重组人il-6。采用3H-TdR法测定rh-il-6的活性。结果：表达产物经纯化后纯度达95％，比活性为3．0x10^8U/mg。结论：本实验设计的纯化工艺简便易行，所得产品纯度度、产率高。

摘要：白介素6(il-6)、白介素8(il-8)和CC趋化因子配体2(CCLi2) 3种细胞因子在炎症反应以及机体免疫方面发挥重要作用。为了揭示球虫感染对脾脏和盲肠中il-6、il-8和CCLi2的表达量的影响,以京海黄鸡(Gallus gallus)为试验材料,设球虫感染组和非感染的对照组,利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测了脾脏与盲肠组织中il-6、il-8和CCLi2的m RNA的相对表达量,比较同一组织感染组与对照组间3个基因表达量的差异,同时分析同一处理组的同一组织内、不同组织间3个基因表达量的相关性。研究结果表明:感染组脾脏组织il-6、il-8和CCLi2三个基因的表达量均显著高于对照组(P 0. 05);在对照组脾脏组织中,il-6、il-8与CCLi2间存在极显著的正相关(P 0. 05);对照组盲肠组织中il-6、il-8和CCLi2之间均存在极显著的正相关(P 0. 05)。以上结果表明,il-6、il-8和CCLi2可能在京海黄鸡球虫感染过程中发挥重要作用,研究结果对进一步探讨这3个基因在球虫病抗病育种中的作用提供了依据,对京海黄鸡球虫病抗病育种具有重要意义。

摘要：目的:为了研究表达il-6的重组K562细胞对自然杀伤细胞(NK)细胞的扩增数量、表型和功能的影响。方法:根据人类il-6 c DNA的5'端序列,设计PCR引物以K562细胞c DNA文库的DNA为模板进行扩增,表达,转染,在K562细胞上表达il-6基因,构建重组的K562工程细胞作为刺激细胞,以人外周血单个核细胞(PBMC)为扩增培养对象,使NK细胞在体外培养条件下得到大量的扩增。流式细胞仪分析NK细胞表型。将NK细胞作用到K562细胞,对其杀伤性进行功能分析,51Cr释放实验检测NK细胞对K562细胞杀伤水平的影响。结果:成功构建了表达il-6的重组K562细胞,和PBMC共同孵育后,培养体系经过21 d的刺激后,il-6重组K562细胞诱导PBMC扩增,CD56+CD16+CD3-细胞数量比诱导前扩增了(760±18)倍,CD56+CD16+CD3-细胞的纯度从培养前占PBMC的6%±0.4%,扩增后第3组结果比未扩增的多了91%±2%。细胞毒实验表明,在NK效应细胞∶K562靶细胞为5∶1时,扩增的NK细胞的杀伤率达到了92%±2%。结论:本方法以重组K562为刺激细胞,能够实现NK细胞体外的大规模制备,建立了优化的NK细胞体外扩增方法,且扩增的细胞杀伤K562细胞的活性较好。对于NK的大量扩增和应用于临床具有重要的指导意义。

摘要：为探讨脑心肌炎病毒(EMCV)感染后il-6、iNOS基因的表达水平,从分子水平深入研究EMCV的致病机制,分别针对小鼠il-6、iNOS及管家基因β-actin的基因序列设计特异性引物和探针,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测il-6、iNOS和β-actin的TaqMan rea-ltime PCR检测方法。该方法线性关系好,il-6、iNOS和β-actin标准曲线的相关系数均达到0.998;敏感性高,初始模板的检出下限均达到1×101拷贝/μL;特异性强,只有以总RNA反转录成的cDNA为模板,并加入特异性引物和探针的反应才检测到荧光信号;重复性好,组内与组间的变异系数均小于2%。应用所建立的检测方法,对猪源EMCV GXLC株感染小鼠的脑、心脏中il-6、iNOS mRNA的表达水平进行了检测。结果表明,本研究建立的TaqMan real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于小鼠il-6、iNOS基因的检测及定量分析。

摘要：【目的】建立针对鸡白介素6(il-6)、白介素17(il-17)和γ干扰素(IFN-γ)的实时荧光定量PCR检测方法,为细胞因子的定量检测及病毒致病机制的研究奠定基础。【方法】根据GenBank已发表的鸡il-6、il-17、IFN-γ和3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因保守序列,设计并合成4对相应的特异性引物,以鸡胚成纤维细胞的cDNA为模板构建重组质粒,对退火温度、引物浓度等SYBR Green I实时荧光定量PCR反应条件进行优化,建立各基因的标准曲线,并进行特异性、敏感性、重复性试验。【结果】GAPDH、il-6、il-17和IFN-γ的SYBR Green I实时荧光定量PCR扩增效率分别是98.2%、99.2%、102.0%和100.8%,相应的标准误差为0.00666、0.00813、0.00365和0.00458。特异性试验结果显示各基因的溶解曲线均呈单一溶解峰,敏感性试验结果表明各基因的检测下限均为100拷贝,重复性试验结果表明组内变异系数均小于2.00%。【结论】建立的SYBR Green I实时荧光定量PCR具有敏感性高、重复性好、特异性强等特点,为快速检测和定量鸡源il-6、il-17和IFN-γ的表达水平提供了技术平台。

摘要：背景:乙醇中毒可致神经系统广泛、严重的损害,并可降低自然杀伤细胞应答而使细胞免疫发生变化。但有关乙醇中毒性免疫损伤和脑损伤关系的研究较少。目的:探讨慢性乙醇中毒患者血清白细胞介素-6(Interleukin-6,il-6)和肿瘤坏死因子α(Tumornecrosisfactoralpha,TNF-α)水平变化及其与乙醇中毒性脑萎缩的关系。设计:对照实验研究。地点和对象:地点为遵义医学院附属第一医院,对象为1999-02/2001-07门诊和住院的32例慢性乙醇中毒患者,均为男性,年龄24～64岁。发病年龄24～50岁,病程2个月～6年。30例对照系健康体检者,均为男性,年龄30～60岁。干预:用双抗体夹心酶联免疫吸附试验测定血清中il-6和TNF-α水平,并结合头颅CT扫描进行分析。主要观察指标:以脑室指数、Huckman值、侧脑室体部指数及三脑室宽度判定脑萎缩程度。根据试剂盒的校正曲线计算血清中相应的il-6和TNF-α浓度。结果:①慢性乙醇中毒组脑萎缩发生率为50%。②慢性乙醇中毒组血清il-6和TNF-α水平犤分别为(286.31±104.79)ng/L,(413.34±66.87)ng/L犦显著高于健康对照组犤分别为(205.43±48.67)ng/L,(261.36±51.48)ng/L犦(P<0.001)。③慢性乙醇中毒有脑萎缩者血清il-6和TNF-α水平犤分别为(343.75±99.59)ng/L,(449.38±55.79)ng/L犦高于无脑萎?

摘要：目的:克隆新疆地区奶牛il-6基因,获得原核表达il-6蛋白。方法:根据GenBank上牛il-6的序列,用premier5.0软件设计一对引物。以牛肺巨噬细胞提取的RNA反转录产物(cDNA)为模板扩增出567bp的条带,克隆到pBS-T载体,测序正确后,提取质粒经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切回收目的条带,亚克隆到pGEX-4T-1原核表达载体,转化DE3菌,经IPTG诱导表达。以表达产物免疫小白鼠血清为一抗检测表达产物的反应原性。结果:成功克隆了新疆地区奶牛il-6基因,克隆部分编码188个氨基酸与GenBank公布的序列100%同源,表达出46kDa的融合蛋白,免疫印迹检测显示原核表达牛il-6有免疫原性。结论:新疆地区奶牛在il-6的基因序列上与其他地方牛无差异,原核表达奶牛il-6蛋白为在奶牛乳房炎疫苗中的佐剂效果研究打下了基础。

摘要：本试验根据GenBank上公布的欧洲兔白介素6（il-6）全基因序列，设计1对引物，用RT-PCR方法从ConA刺激诱导的中国白兔外周淋巴细胞的总RNA中扩增出中国白兔il-6基因cDNA，并对其进行克隆和序列分析。结果表明，成功地克隆出了中国白兔il-6基因，其开放阅读框为726bp。序列分析表明，中国白兔与欧洲兔il-6基因（AFl69176）同源性为100％，与GenBank上公布的其他的几种兔的il-6基因不完全序列的同源性从84．9％～91．1％不等。目前很少有关兔白细胞介素的报道，兔il-6的克隆在国内尚属首次。