摘要：为了研究inha基因在马关无角山羊卵泡发育中的作用,设计并化学合成了3条针对inha基因的si RNA,脂质体法转染至马关无角山羊的卵巢颗粒细胞,Real-time PCR技术和WesternBlot技术对其干扰效率进行了筛选。结果表明:si RNA-2对inha基因m RNA表达抑制率达到了94.3%,对蛋白表达的抑制率达到了93.4%,是inha基因沉默的最佳干扰质粒,可为今后研究inha基因的功能提供基础。

摘要：试验旨在探究GnRHR和inha基因遗传变异及其互作效应对绵羊产羔数的影响。参考GenBank发布的绵羊GnRHR基因(登录号:AH004943)和牛inha基因(登录号:U16237)的DNA序列设计引物,采用PCR-SSCP技术检测GnRHR和inha基因在乌湖羊、湖羊、乌骨绵羊中的遗传多态性,分析多态位点与产羔数的相关性,以及GnRHR和inha基因间互作效应。结果显示,乌湖羊和湖羊群体GnRHR和inha基因均存在多态位点,分别检测到GG、GC、CC和AA、AB、BB基因型,乌骨绵羊因样本较少,未发现多态位点。测序发现,GnRHR基因编码区198 bp处发生G→C突变,导致甘氨酸变为精氨酸,为错义突变;inha基因877 bp处发生T→C突变,为同义突变(仍为天冬氨酸)。遗传学分析显示,GG和AA为优势基因型,G和A为优势等位基因;χ2适合性检验显示,试验羊群体GnRHR和inha基因型分布处于Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);分析GnRHR与inha基因互作效应发现,基因互作效应在乌湖羊和湖羊群体差异显著(P<0.05),ABCC互作基因型互作效应最大,AAGG互作基因型互作效应最小。乌湖羊ABCC互作基因型的平均产羔数比AAGG互作基因型多1.68只,湖羊ABCC互作基因型产羔数比AAGG互作基因型多1.32只,ABCC互作基因型比AB和CC基因型的产羔数都高,表明互作效应与羊产羔数呈正相关。本研究认为,inha基因T877C位点与GnRHR基因G198C位点互作基因型与绵羊产羔数紧密关联,对试验羊群体产羔数影响显著。

摘要：研究旨在根据基因多态性和超数排卵效果的关联分析,找到一种能预测水牛超数排卵反应的因子。以127头水牛(摩拉、尼里、地中海、本地、杂交水牛)为材料,采集血样,提取基因组DNA。采用PCR及DNA测序技术,以Gen Bank公布的牛FSHR(follicle stimulating hormone receptor)、inha(inhibin alpha)、LHCGR(luteinizing hormone/choriogonadotropin receptor)、OPN(osteopontin)基因序列为参考序列,设计PCR引物,对FSHR的5'上游调控区、inha第1外显子、LHCGR第11外显子和OPN3907启动子进行了基因型检测,并将基因多态性与45头水牛的超数排卵性状进行了关联分析。结果表明:FSHR、inha、LHCGR的相应SNP位点都不存在多态性;OPN基因启动子上游存在T碱基插入/缺失突变,T9/T9、T10/T10、T9/T10的基因型频率分别为:0.4020、0.1275和0.4634。此外,T10/T10型水牛在第5次超数排卵时获得的可用卵母细胞数显著高于T9/T9型水牛(P<0.05)。以上结果预示,OPN可作为水牛超数排卵效果的一个预测因子。

摘要：目的开发快速检测耐利福平与异烟肼结核分枝杆菌rpoB、katGi、nhA基因突变的DNA芯片。方法根据结核分枝杆菌rpoB、katGi、nhA基因序列设计探针并制作基因芯片,从临床样品中分离出结核分枝杆菌的基因组DNA,PCR扩增含有上述几个基因突变位点的特异DNA片段,并事先在PCR引物的5′端作生物素标记,然后与膜条芯片上的检测特异突变位点的寡核苷酸探针进行杂交,通过生物素-链霉亲和素-过氧化物酶体系显色,直接观察突变情况,以此来判断耐药结果。结果35个利福平和异烟肼单耐药或多药耐药的结核分枝杆菌中有82.9%用芯片法检出的结果与药敏培养法一致;其中利福平耐药样品突变检出率为100.0%;有20.0%异烟肼耐药的样品芯片未检出突变,可能是突变发生在芯片检测位点范围之外。结论用DNA芯片检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,具有较高的特异性和敏感性,可用于临床结核分枝杆菌耐药性检测。