摘要：目的建立结核分枝杆菌IS6110和is1081微滴数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)检测体系,并用于不同类型临床样本的检测。方法常规提取13株结核分枝杆菌和14株非结核分枝杆菌临床分离株DNA,9例结核分枝杆菌阳性肺结核患者和4例其他肺部疾病患者痰DNA,12例结核分枝杆菌阳性肺结核患者和7例健康者血浆DNA。设计合成IS6110和is1081扩增引物和检测探针,建立dd PCR检测体系。应用该体系检测分枝杆菌、痰和血浆3种DNA样本中靶标拷贝数,进行统计学分析。结果建立了能同时检测IS6110和is1081的dd PCR体系,该体系检测2个靶标的线性范围分别为0.5~8 733和0.2~2 893拷贝/μl反应体系。该体系具有较好的重复性(r>0.95),以非结核分枝杆菌为对照检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异度均为100%。在痰和血浆DNA样本检测中,2个靶标拷贝数在肺结核组均显著高于对照组。结论结核分枝杆菌特异性核酸的dd PCR体系,可用于肺结核患者临床分离株、痰和血浆样本的微量核酸检测,对提高结核病病原学诊断能力有重要意义。

摘要：本研究基于is1081基因建立了鉴定犬结核的SYBRGreen荧光定量PCR方法。在最佳反应条件下反应效率为1．09，获得的标准曲线相关系数R值达0．9995，标准曲线的线性范围达到1～1×10^7拷贝8个数量级，最低可检测到约10个目的拷贝，即31．4fg DNA。根据溶解曲线分析，扩增产物中无引物二聚体的影响，说明所设计引物特异，退火温度合适。这表明本研究建立的SYBR Green荧光定量方法灵敏度高、定量范围广。利用该方法对临床样品进行检测，结果发现：与结核杆菌分离培养方法比较，符合率为85％。240份犬猫鼻拭子中150份被检测为阳性，这说明犬猫鼻腔中分枝杆菌携带率很高。